逆相条件での分離（テオブロミン・テオフィリンの分離）

テオブロミン、テオフィリンをオープンクロマトグラフィーで逆相分離する場合、十分な分離度を得るためには有機溶媒濃度を50% 以下にしなければなりません。 このような水濃度が高い展開溶媒では、従来の逆相充填剤は浮き上がってしまい、分離に用いることができませんでした。
しかしコスモシールC₁₈-OPN 充填剤では、図1に示したように水濃度70% の展開溶媒でも使用可能となり、完全に分離することができます。

分析条件
充填剤	COSMOSIL 75C18-OPN		サンプル	Theobromine Theophylline （各100mg）
カラム	内径20mm ベット高250mm
移動相	メタノール: 水=30：70
流　速	0.2ml/min
温　度	室温
検　出	UV 254nm

コスモシールC₁₈-OPN は、75、140µm　2 種類の粒子径をご用意しています。粒子径の違いによりピークの鋭さや、流速は異なりますが、溶出挙動は同じです。用途にあった粒子径を選択してください。

75µm と140µm の比較

順相、逆相条件での分離（p - クレゾール・p - エチルフェノールの分離）

p - クレゾール、p - エチルフェノールはメチレン基1 個の構造差であり、シリカゲル順相条件での分離は非常に困難ですが、疎水性相互作用を主とする逆相条件では容易に分離することができます。以下の図はシリカゲルでの順相分離とコスモシールC₁₈-OPN 充填剤での逆相分離の比較例ですが、コスモシールC₁₈-OPN 充填剤では完全に分離できます。
溶出時間はシリカゲル順相よりも長くかかっていますが、これはメタノール- 水系溶媒のため粘度が高く流速が遅いためであり、分離に必要な溶媒量は約20mlと順相条件の溶出容量約40ml の1/2 となっています。

カラムサイズと必要なおよそのC₁₈-OPN 充填剤量

カラムクロマト用充填剤のカラム充填方法については、TECHNICAL NOTE ⑫カラムクロマト用充填剤のカラム充填方法をご参照ください。

コスモシールC₁₈-OPN 充填剤はテトラヒドロフランやクロロホルムのような溶出力の強い溶媒で洗浄することによって充填剤に吸着した不純物を除去することができます。また、洗浄後再使用した場合でも再現性が良好で、繰り返し使用することができます。
（注意）
シリカゲルを溶解するような高いpH（pH 7 以上）、あるいはC₁₈ 固定相の化学結合が切断されるような低いpH（pH 2以下）での洗浄は避けて下さい。洗浄後の充填剤の乾燥は50℃以下にして下さい。