製品情報

モノクローナル標識Tag抗体

アガロースを結合した抗体は、細胞ライセートからのタンパク質の免疫沈降などに用いられます。POD標識抗体はウェスタンブロッティング・ELISAなどに適用され、標識二次抗体を用いる必要がなく時間・手間を省くことができます。

未標識のTag抗体はこちら

Anti-GFP(Rat IgG2a), Monoclonal(GF090R), CC, Agarose Conjugate

弊社ラット抗GFP抗体は、世界中で使用されており、使用文献も多数報告されています(抗体の使用文献はこちら)。ここでは、アガロースにこのラット抗GFP抗体を結合した製品を紹介します。

製品説明

Clone GF090R
Isotype IgG2a(Rat)
Size 500μg
Antibody Protein 2mg antibody/ml agarose
Product form 1:1 suspension in Dulbecco's PBS(-)

使用例

実験概要

  1. EGFPまたはEGFP-myosinを発現するHEK-293細胞のライセート1mlに、抗GFP抗体アガロースを20μlそれぞれ添加し、4℃で2時間免疫沈降した。
  2. SDSサンプルバッファーを加え、90℃で10分間処理し、SDS-PAGEを行った。
  3. 抗GFP抗体を用いてウェスタンブロッティングにより、EGFPとEGFP-myosinを検出した。 

06083.jpg

データご提供:

京都大学 生命科学研究科 高次生命科学専攻 高次生体統御学 垣塚研究室
垣塚 彰 教授 / 堀 清次 講師 / 笹岡 紀男 研究員

使用文献

Kumeta, M et al. Molecular mechanisms underlying nucleocytoplasmic shuttling of actinin-4. J Cell Sci. 123(Pt 7), 1020-30 (2010).

価格表

製品名製品番号容量オンライン
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Anti-GFP(Rat IgG2a), Monoclonal(GF090R), CC, Agarose Conjugate 06083-05 500 μg e-Nacalai.jpg

製品説明

Clone MC045
Isotype IgG1-κ(Mouse)
Size 500μg
Antibody Protein ca. 2mg antibody/ml agarose
Product form 1:1 suspension in Dulbecco's PBS(-)

使用例1

c-Mycタグの付いたプラスミドを細胞にトランスフェクションしました。その後細胞ライセートをc-Myc-Agarose抗体で免疫沈降し、ウェスタンブロッティングでの検出を行いました。

04145_1.jpg

免疫沈降 Anti-c-Myc, Agarose conjugate(1:500)
ウェスタンブロッティング Anti-c-Myc(#04362)

データご提供:国立大学 研究者

使用例2

c-Myc tagged Proteinとの反応

実験概要

  1. 均一に懸濁させたAnti-c-Myc-Agarose(#04145-55)0.05mlをフタ付きポリプロピレン容器(0.5ml)に分注し、Rinse buffer 0.4ml、およびc-Myc tagged protein(1mg/ml)1μlを添加して静かに転倒攪拌する(室温、2時間)。
  2. 遠心分離(10秒間)で樹脂を沈殿させた後、Rinse bufferを分注器で吸引除去する。さらに、新たなRinse buffer 0.4mlを加えて転倒攪拌(10秒間)して遠心分離する。(5回繰り返し)
  3. Rinse bufferを濾紙片で十分に吸引除去したAgarose樹脂、未使用の同Agarose樹脂、およびフタ付きポリプロピレン容器(0.5 ml)に分注したc-Myc tagged protein(1mg/ml)1μl、の各々にSDS-PAGE電気泳動緩衝液(+2ME)0.05mlを添加して煮沸水浴で加熱(5分間)する。
  4. 水冷後に遠心分離(10秒間)して、各上清1μlをSDS-PAGE(10%)で電気泳動する。

*Rinse buffer:50mM Tris-HCl pH7.5, 150mM NaCl, 1%(v/v)NP-40, 10mM EDTA, 1mM PMSF, 10μM pepstatin, 20μM leupeptin

04145_2.jpg

SDS-PAGE(10%) 30mA constant, 60分
サンプル ①M.W. Marker
②Anti-c-Myc-Agarose + c-Myc tagged protein
③Anti-c-Myc-Agarose
④c-Myc tagged protein

結果

Anti-c-Myc-Agarose(左図③)にc-Myc tagged protein(左図④)を反応させた結果、c-Myc tagged proteinはAgarose樹脂に結合した(左図②)。

使用例3

非特異吸着の確認

実験概要

使用例2と同様の手順でc-Myc tagged protein(1mg/ml)をbacterial lysate 1μlに変えて操作しました。

04145_3.jpg

SDS-PAGE(10%) 30mA constant, 60分
サンプル ①M.W. Marker
②Anti-bacterial lysate
③Anti-c-Myc-Agarose + bacterial lysate

結果

不特定多数のタンパク質を含有するbacterial lysateをAnti-c-Myc-Agaroseに反応させても、非特異的なタンパク質の樹脂吸着はほとんどおこっていません。

価格表

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Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, Agarose Conjugate 04145-55 500 μg e-Nacalai.jpg

製品説明

Clone GF200
Isotype IgG1-κ(Mouse)
Product form Liquid
Immunogen His-GFP(full length) fusion protein
Application Western Blotting 1:1,000-1:2,000
ELISA 1:2,000-1:4,000

価格表

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Anti-GFP(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(GF200), AS, POD Conjugated 05178-34 50 μg e-Nacalai.jpg

製品説明

Clone GS019
Isotype IgG2a-κ(Mouse)
Product form Liquid
Immunogen Glutathione S-Transferase(GST)
Application Western Blotting 1:4,000-1:8,000
ELISA 1:30,000-1:60,000

価格表

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Anti-GST(Mouse IgG2a-κ), Monoclonal(GS019), AS, POD Conjugate 04559-74 50 μg e-Nacalai.jpg

製品説明

Clone HI192
Isotype IgG1-κ(Mouse)
Product form Liquid
Immunogen 6xHis synthetic peptide [HHHHHH] conjugated with KLH
Application Western Blotting 1:1,000-1:2,000
ELISA 1:30,000-1:60,000

使用例

ロシュRTS500で合成したGFP-His6を原液もしくはPBSで10倍希釈したものを各々2.5μlアプライした。

04546.jpg

Lane1 GFP-His6(原液)
Anti-His6(A社)(1:100,000), Anti-Mouse IgG (1:100,000)
Lane2 GFP-His6(10倍希釈液)
Anti-His6(A社)(1:100,000), Anti-Mouse IgG (1:100,000)
Lane3 GFP-His6(原液)
Anti-His6 POD(#04546)(1:100,000)
Lane4 GFP-His6(10倍希釈液)
Anti-His6 POD(#04546)(1:100,000)

価格表

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Anti-6xHis(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(HI192), AS, POD Conjugated 04546-34 50 μg e-Nacalai.jpg

製品説明

Clone MC045
Isotype IgG1-κ(Mouse)
Product form Liquid
Immunogen c-Myc synthetic peptide [EQKLISEEDL] conjugated with KLH
Application Western Blotting 1:1,000-1:2,000
ELISA 1:30,000-1:60,000

価格表

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Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, POD Conjugated 04554-24 50 μg e-Nacalai.jpg

製品説明

Clone V5005
Isotype IgG1-κ(Mouse)
Product form Liquid
Immunogen V5 synthetic peptide [GKPIPNPLLGLDST] conjugated with KLH
Application

Western Blotting 1:1,000-1:2,000
ELISA 1:8,000-1:16,000

価格表

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Anti-V5(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(V5005), AS, POD Conjugated 04578-24 50 μg e-Nacalai.jpg

※記載の内容は、'17年1月現在の情報に基づいております。

※研究者の皆様のご所属などは、データご提供時の情報に基づいております。