新製品情報

サンプル1μlだけでELISAと同等の感度！
Olink Bioscience社　Proseek®

 

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内在性タンパク質相互作用を検出するユニークなシステム（Duolink® in situ PLATM）を有するOlink Bioscience社（スウェーデン）より新たな技術（PEA: Proximity Extension Assay）が開発*1され、製品化されましたのでご紹介します。本製品は血清/血漿サンプル中に存在する目的タンパク質を、洗浄ステップや条件検討といった煩雑な操作無く、簡単に、高感度に検出することができます。

*1Lundberg, M et al, Homogeneous antibody-based proximity extension assays provide sensitive and specific detection of low-abundant proteins in human blood. Nucleic Acid Res (2011).

特長

  • 1μlのサンプル量でELISAと同等の感度
  • 条件検討の必要なし
  • 特殊な装置は不要
| 原理| 注意点 | 器具・機器| 性能評価|Q＆A | 価格表 |

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原理

genri_1.gif ①Proseek® Probemaker AとBを使用して、オリゴAとBをそれぞれ抗体へ連結し、Proseek probes AとBを作成する。
genri_2.gif ②スタンダードとサンプルへProseek® probe AとBを加えてインキュベーションする。
genri_3.gif ③インキュベーション中にProseek® probeがターゲットタンパク質へ結合する。
 genri_4.gif ④DNAポリメラーゼを加え、相補鎖を合成し、リアルタイムPCRにおける鋳型を作成する。
genri_5.gif ⑤リアルタイムPCRマスターミックスを加える。
genri_6.gif ⑥リアルタイムPCR装置を使用してターゲット領域を増幅する。
genri_7.gif ⑦得られたデータを分析する。

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注意点

Proseek® Probemakerを使用する際の注意点
  1. ポリクローナル抗体を使用する場合は、抗原にタンパク質全体か少なくとも大きなフラグメントで免疫し、アフィニティー精製にはプロテインAやGではなく抗原を用いたものを使用してください。
  2. 使用する抗体は10μl ですが、濃度を1mg/mlに調製してください。
  3. 抗体の希釈バッファーはアミンフリーにしていただく必要があります。BSA、トレハロース、アジ化ナトリウムの許容濃度はそれぞれ0.1%、5%、0.02%です。PBSが推奨です。
  4. １つのProbemakerから作製されるprobeは100,000反応（96wellプレートの場合）ですが、分割して使用することはできません。

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器具・機器

実験に必要な主な器具・機器
  • リアルタイムPCR装置
  • ピペット（マルチチャネルピペット推奨）
  • マイクロプレート（96または384 well）
  • サーマルサイクラー
  • ボルテックスミキサー
  • 遠心機（プレート）
  • インキュベーター（37℃）
  • マイクロチューブ
  • マイクロプレート用密着フィルム

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性能評価

他社IL-8 ELISAキットとの比較例

A社 IL-8 ELISA kitProseek®
seihouhyouka_A.gif  seihouhyouka_Proseek.gif
サンプル使用量： 100μl
感度： 30-40 fM
Recovery： 98-104%
Precision：  6.7%
ダイナミックレンジ：  3-4Log
アッセイ時間： 5時間20分（＋wash）
サンプル使用量： 1μl
感度： 110 fM
Recovery： 85%
Precision： 11%
ダイナミックレンジ： 3-4Log
アッセイ時間： 4時間20分

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Q＆A

質問回答
どのようなサンプルで使用可能ですか？ 現時点では、血清、EDTA血漿、クエン酸血漿、脳脊髄液用にプロトコールが最適化されています。
Proseek®アッセイを始めるためには何を購入すればいいですか？ Proseek® Probemaker A、Proseek® Probemaker B、Proseek® Assay Reagentsの3製品が必要です。なお、３つがセットになっているProseek® Starter Kitもございます。
Probemakerで標識した抗体probeは保存できますか？ 保存可能です。抗体によりますが、製品に同包されているStorage Solution中では4℃で概ね12ヶ月間、Probe Diluent中では4℃で3ヶ月間安定です。
どのリアルタイム PCR装置で使用できますか？ 現時点で確認しているのはApplied Biosystems 7900、Applied Biosystems StepOne™、Stratagene MX3000Pです。
どのようなターゲットでも検出できますか？ 現時点では、TNF-αではうまく機能しないとの報告があります。

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価格表

製品名メーカー
製品番号		容量価格買い物
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Proseek® Starter Kit
キット内容：Proseek® Probemaker A（#93001-0010）、Proseek® Probemaker B（#93002-0010）、Proseek® Assay Reagents（#93003-0100）		 93101-0100 100 reactions 253,000
Proseek® Probemaker A 93001-0010 10 μg*2 67,000
Proseek® Probemaker B 93002-0010 10 μg*2 67,000
Proseek® Assay Reagents 93003-0100 100 reactions 153,000

*2抗体10μg を標識し、100,000well 分のprobe が作製できます。ただしProbemaker を分割して、複数の抗体を標識することはできません。

※掲載の内容は、'11年08月現在の情報に基づいております。

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