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充実したラインアップ
InvivoGen社　細胞質内DNAセンサーSTING研究用試薬

InvivoGen社は自然免疫研究用試薬で高い評価を受けているメーカーです。細胞質内DNAセンサーとして知られているSTING研究用の製品を紹介します。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

STINGは、dsDNAの刺激によりTBK1とIRF3を活性化しI型インターフェロンの発現を誘導するアダプタータンパク質です。一方でSTINGが環状ジヌクレオチド（CDN）と直接結合することで、I 型インターフェロンを誘導することも知られています。

 

 

製品カテゴリー

■STINGレポーターアッセイ用細胞

STING遺伝子をノックアウトした細胞を取り揃えています。野生型と比較することでアッセイをすることができます。

■変異型STING発現ベクター

ヒトまたはマウスの変異型 STINGを発現するベクターです。

■STINGリガンド

STINGを刺激してインターフェロンの発現を誘導するリガンドで、2種類のグレードからお選びいただけます。

 

 

STINGレポーターアッセイ用細胞

STING遺伝子をノックアウトしたレポーターアッセイ用細胞を販売しています。この細胞は、IRF誘導性プロモーターにより制御されているレポーター遺伝子であるSEAP（分泌型アルカリホスファターゼ）もしくはLucia（ルシフェラーゼ）が組み込まれています。分泌されたSEAP、Luciaは、検出試薬であるQUANTI-Blue™ もしくは QUANTI-Luc™を用いて簡単に検出することができます。 

 

 

実施例

■THP1-Dual™ 細胞とTHP1-Dual™ KO-STING 細胞のリガンドに対する応答

 

THP1-Dual™ 細胞とTHP1-Dual™ KO-STING 細胞を100ng/ml poly(I:C)LMW/LyoVec™、1μg/ml VACV-70/LyoVec™、3μg/ml 2'3'-cGAMP、10μg/ml c-di-AMPにより刺激した。1×10⁴ U/ml ヒトIFN-αとIFN-βはポジコンとして使用した。 IRFの活性化はLucia（ルシフェラーゼ）検出試薬であるQUANTI-Luc™ を用いてルミノメーターにより発光量を測定した。各リガンドの活性化は、IFN-βによる活性化を100%とした場合の相対値として示されている。

 

 

■B16-Blue™ ISG 細胞とB16-Blue™ ISG-KO-STING 細胞のリガンドに対する応答

 

両細胞を30μg/ml CDNsまたは10³ U/ml mIFN-βにより刺激し、24時間インキュベーションした後、SEAPをQUANTI-Blue™を用いて定量した。

 

 

■RAW-Lucia™ ISG 細胞とRAW-Lucia™ ISG-KO-STING 細胞のリガンドに対する応答

 

両細胞を30μg/ml CDNsまたは10³ U/ml mIFN-βにより刺激し、24時間インキュベーションした後、LuciaをQUANTI-Luc™を用いて定量した。

 

 

価格表

THP1-Dual™ KO-STING Cellsには、Blasticidin、Zeocin™、Normocin™、アッセイ用の基質（QUANTI-Blue™およびQUANTI-Luc™）が含まれています。その他の製品はZeocin™、Normocin™とQUANTI-Blue™またはQUANTI-Luc™が含まれています。
本製品はお手元に到着次第、すぐに培養する必要があります。

 

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変異型STING発現ベクター

CDNの認識やシグナル伝達に影響を与えるいくつかの変異型STINGがヒトおよびマウスで報告されています。InvivoGen社では、これら変異型STINGを発現ベクター（pUNO1）へ組み込んだ状態で販売しています。

 

 

製品情報

■変異導入部位

赤字：変異アミノ酸

 

 

 

■ベクターマップ

 

 

性能評価

■変異型STINGのCDNsおよびDMXAAに対する応答

 

HEK-Blue™ ISG KO-STING細胞にSTING WTもしくはSTING変異体をトランスフェクションし、その細胞を、10μg/ml 2’3’-cGAMP、3’3’-cGAMP、c-di-GMPもしくはDMXAAにより刺激した。24時間インキュベーション後、SEAPの量をQUANTI-Blue™を用いて定量した。

 

 

参考文献

1. Yi, G. et al. Single Nucleotide Polymorphisms of Human STING Can Affect Innate Immune Response to Cyclic Dinucleotides. PLoS One. 8(10), e77846 (2013).
2. Diner, EJ. et al. The innate immune DNA sensor cGAS produces a noncanonical cyclic dinucleotide that activates human STING. Cell Rep. 3(5), 1355-1361 (2013).
3. Jin, L. et al. Identification and characterization of a loss-of-function human MPYS variant. Genes Immun. 12(4), 263-269 (2011).
4. Gao, P. et al. Structure-function analysis of STING activation by c[G(2',5')pA(3',5')p] and targeting by antiviral DMXAA. Cell. 154(4), 748-762 (2013).
5. Conlon, J. et al. Mouse, but not human STING, binds and signals in response to the vascular disrupting agent 5,6-dimethylxanthenone-4-acetic acid. J Immunol. 190(10), 5216-5225 (2013).
6. Chen, H. et al. An Alternative Splicing Isoform of MITA Antagonizes MITA-Mediated Induction of Type I IFNs. J Immunol. 192(3), 1162-1170 (2014).
7. Yin, Q. et al. Cyclic di-GMP sensing via the innate immune signaling protein STING. Mol Cell. 46(6), 735-745 (2012).
8. Sauer, JD. et al. The N-ethyl-N-nitrosourea-induced Goldenticket mouse mutant reveals an essential function of Sting in the in vivo interferon response to Listeria monocytogenes and cyclic dinucleotides. Infect Immun. 79(9), 688-694 (2011).
9. Liu Y. et al. Activated STING in a vascular and pulmonary syndrome. N Engl J Med. 371(6), 507-18 (2014).

 

 

価格表

各製品にはFast-media^® BlasおよびBlasticidinが含まれています。

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STINGリガンド

環状ヌクレオチド（CDN）とDMXAAなどのXanthenone誘導体は、STINGを活性化し、強力なI型インターフェロン応答を誘導するため、自然免疫応答のアゴニストとして注目されています。新製品も拡充されましたので、製品ラインアップ全体を紹介します。

 

 

特長

• 2種類のグレードを提供
• 保証項目も充実

 

 

グレード

通常グレードと前臨床用グレードのVacciGrade™の2種類を提供しています。

• 通常グレード ：純度95%以上、リガンド活性をレポーター細胞により評価
• VacciGrade™ ：通常グレードの項目に加え、エンドトキシン（＜0.005EU/μg）、完全滅菌条件下での製造を保証

 

■レポーター細胞を用いた活性評価の例

 

 

InvivoGen社より販売のレポーター細胞THP1-Blue™ ISG cellsおよびRAW-Lucia™ ISG cellsを用いて、各リガンドの活性を評価しています。 

 

 

価格表 

※記載の内容は、'16年11月現在の情報に基づいております。