新製品情報

PAGE Clean Up Kit

 

二次元電気泳動やSDS-PAGEのサンプル調製に最適な製品をご紹介します。
本製品はアセトン、トリクロロ酢酸、共沈剤をタンパク質の沈殿に最適化した製品です。本試薬により沈殿させたタンパク質を使用目的に応じたサンプル溶解液に再懸濁することで、サンプルタンパク質の濃縮やバッファー中の分析妨害物質の除去ができます。

特長

  • タンパク質サンプルの濃縮や分析妨害物質の除去に最適
  • 高濃度の尿素・グアニジン・SDS存在下でも沈殿可能
  • 透析より簡単でμｌレベルの小容量処理も可能

使用例

■ 二次元電気泳動用サンプル調製
CBB染色結果  
 PAGE Clean Up Kit  A社製品  
L117_PAGEClean Up_CBB-2.jpg L117_Asya_CBB-2.jpg 【サンプル】
HL-60細胞由来タンパク質
(RIPA Buffer#08714-04抽出)
【電気泳動】
一次元: Immobiline pH 4-7
二次元: SDS-PAGE(12％ゲル)
【染色】
・CBB Stain One #04543(CBB染色)
・Sil-Best Stain One #06865-81(銀染色)   
銀染色結果
 
 PAGE Clean Up Kit  A社製品
  L117_PAGEClean Up_gin-2.jpg
   L117_Asya_gin-2.jpg
A社製品で沈殿処理したサンプル、PAGE Clean Up Kitで沈殿処理したサンプルについて、それぞれ二次元電気泳動を実施した結果、同等の泳動像が得られました。
 



■ タンパク質の濃縮　1
L117_tanpakusituno1-web.jpg  【サンプル】
BSA(100ng)　100μl
【沈殿法】
①本品使用
②TCA沈殿法を使用
③10倍容アセトン沈殿法を使用
【電気泳動】
SDS-PAGE（12％ゲル）
【染色】
Sil-Best Stain One #06865-81(銀染色)
タンパク質抽出に汎用される高濃度の尿素、グアニジン塩酸塩、SDSは、従来のTCA法やアセトン法の回収率を下げる要因でしたが、本品沈殿法への影響は低く、高い収率でBSAを回収できました。



■ タンパク質の濃縮　2

L117_tanpakusituno2-web.jpg 【サンプル】
Protein Markers(10x) #29458-24 の10倍希釈(標準濃度)
【電気泳動】
SDS-PAGE（12％ゲル）
【染色】
CBB Stain One #04543(CBB染色))
表1：上図 標準濃度からの希釈倍率(①⑩は標準濃度)
希釈倍率 希釈サンプル 沈殿後サンプル
25倍
 レーン②
 レーン③
10倍 レーン④ レーン⑤
5倍 レーン⑥ レーン⑦
2.5倍 レーン⑥ レーン⑨
 
レーン①のタンパク質マーカーを表1の希釈倍率のとおり希釈しました。希釈した各サンプルを本キットにより沈殿後、液量を減らして高濃度のサンプルを調製しました。沈殿前後のサンプルを電気泳動後、CBB染色した結果、濃縮前では検出が困難な濃度の薄い各サンプルをタンパク質のロス無く濃縮でき、①と同等のバンドが確認できました。



■電気泳動妨害物質の除去

L117_denkieidou_web.jpg		 【サンプル】
A)Protein Markers(10x) #29458-24 の10倍希釈(標準濃度)
B)BSA(100ng：非還元)
【沈殿処理】
①本品未使用
②本品使用
【電気泳動】
SDS-PAGE（12％ゲル）
【染色】
A)CBB Stain One #04543(CBB染色)
B)Sil-Best Stain One #06865-81(銀染色)
泳動像に影響を与える成分を含むサンプルを本品で処理したところ、泳動像が改善されました。
注）収率はサンプル溶解液の組成やタンパク質濃度等により異なる場合があります。予備検討の上、ご使用ください。

製品構成

試薬 主な成分 容量
Solution A トリクロロ酢酸 10 ml
Solution B 共沈剤   5 ml
Solution C アセトン  100 ml

使用方法

① 100μlのサンプルにSolution Aを100μl添加、混合後、さらにSolution Bを30μl添加し混合します。 
② 4℃で12000xg、5分間、遠心分離した後、上層の液を捨てます。充分に液を除去するために、さらに4℃で12000xg、10秒間、遠心分離し、上層の液を捨てます。
③ Solution Bを20μl添加し、沈殿物を十分にボルテックスします
（この時沈殿物は完全に溶解しません）。 
④ 4℃で12000xg、5分間、遠心分離した後、上層の液を捨てます。 
⑤ 冷凍庫で予め冷やしておいたSolution Cを1ml入れ、沈殿物を十分にボルテックスします。
⑥ 冷凍庫で30分間、静置してください。
⑦ 4℃で12000xg、5分間、遠心分離した後、上層の液を捨てます。充分に液を除去するために、さらに4℃で12000xg、10秒間、遠心分離し、上層の液を捨てます。 
⑧ 室温で5分間程度、風乾します。
⑨ 電気泳動の試料緩衝液等、使用目的に応じたサンプル溶解液を添加し、十分に溶解してください。

価格表

製品名 規格貯法 メーカー
製品番号		容量価格 買い物
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PAGE Clean Up Kit SP 冷蔵 06441-50 1 kit
(100 回用)		  35,000  

※掲載の内容は、'11年4月現在の情報に基づいております。

 

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