新規脱ユビキチン化酵素(DUB)活性測定用ユビキチン二量体基質(DiUb)
LifeSensors社のIQF-DiUb™基質は、イソペプチド結合の切断を連続してモニタリングできる脱ユビキチン化酵素基質として市場で最初に発売されました。これは、1つのユビキチンに蛍光体、他方のユビキチンにクエンチャーをそれぞれ組み込んだ内部消光蛍光(IQF)分子を作成することにより実現しました。ユビキチン間のイソペプチド結合が切断されると、クエンチャーと蛍光体が分離して蛍光が増加します。ユビキチン構造に与える影響を最小に抑えるため、蛍光体とクエンチャーは、N末端やC末端ではなくユビキチン分子内の特定の部位に結合されています。標識部位によってはDUBによる認識に影響を与えるため、各結合について標識部位が異なる複数種類のジユビキチン基質が一緒になっているパネルを用意しています。たとえば、LifeSensors社のK48結合ジユビキチンについては6種類あります。まずはジユビキチンパネルを用いて、目的結合型のどの種類を使えばお客様のアッセイ条件において最適な結果を得られるのか検討することをお勧めします。
特長
- 生理条件に最も適したDUB基質
- DUBの最適条件検討用に結合型/蛍光体の位置について多様な組み合わせをご用意
- 真のイソペプチド結合切断活性の測定
- ハイスループット対応(96および384ウェル形式で実証済み)
- 蛍光体の位置はN末端やC末端(ユビキチン構造に影響を与えることが知られている位置)以外
使用例
国内研究者使用例"基質のユビキチン結合型の違いによる脱ユビキチン化酵素活性の違い"はこちら(別のページへ移動します)
DUBであるAMSH coreの活性をDiUb48またはDiUb63のバリアントを用いて測定した。DUB不含のものをバックグラウンドとしてシグナル対バックグラウンドを算出した。その結果、K63のバリアント1(DU6301)に対して高い活性を示した。
K48とK63については、使用するDUBに最適な基質を選択するために、まずは全バリアントがセットになっているPanelを使用されることをお薦めします。
価格表
*1 DiUb 48-1、DiUb 48-2、DiUb 48-3、 DiUb 48-4、 DiUb 48-5、 DiUb 48-6、DiUb 63-1、DiUb 63-2、DiUb 63-3、 DiUb 63-4、DiUb 63-5、DiUb 63-6各25μl(20μM)がセットになっています。各構成品の重量はおよそ9.2μgです。
*2 DiUb 48-1、DiUb 48-2、DiUb 48-3、 DiUb 48-4、 DiUb 48-5、 DiUb 48-6各25μl(20μM)がセットになっています。
*3 DiUb 63-1、DiUb 63-2、DiUb 63-3、 DiUb 63-4、DiUb 63-5、 DiUb 63-6各25μl(20μM)がセットになっています。
※記載の内容は、'16年4月現在の情報に基づいております