ナカライテスク

簡単！　グラジエントゲル様の分離
ナカライテスク社　WIDE RANGE Gel Preparation Buffer (4X) for PAGE

本製品は、アクリルアミド/ビス混合液などに緩衝液として加えるだけで、均一ゲルと同じ作成方法でグラジエントゲルのように分析範囲が広いゲルを作成することが出来ます。泳動緩衝液や試料緩衝液は従来と同じものが使用できます。また、CBB染色、銀染色などの染色法においても、通常のゲルと同様に染色できます。

 

特 長

• 広範囲の分子量レンジで分離可能なゲルが作製可能
• 従来の均一ゲルと同様の簡単な作製方法
• 分離/濃縮ゲルの調製に緩衝液の使い分け不要 
• ゲルの保存性や強度が向上

 

■本製品の特長について詳細を以下に記載します。

製品の使用法	本品は４倍濃縮の中性緩衝液で、Laemmli法におけるゲル調製のトリス-塩酸緩衝液の代わりに本製品を用いることで、分離ゲルと濃縮ゲルの調製にご使用頂けます。泳動緩衝液、試料緩衝液はLaemmli法の溶液をご使用頂けます。
ゲルの保存性/強度	本品は中性緩衝液のため、ゲルの保存安定性がLaemmli法のゲルより改善しています。またゲル強度が高く、取り扱いが容易です。

性能評価

■SDS-PAGE
本品添加10%アクリルアミドゲルとLaemmli法12%アクリルアミドゲル及び
プレキャストグラジエントゲルとの比較

 

【分析条件】
サンプル：タンパク質マーカー（製品番号：29458）（1x）
染色：CBB Stain One（製品番号：04543）

 

 

 

本品添加10%ゲルを使用することで、従来のLaemmli法の12%ゲルでは分離できなかった低分子タンパク質（6.5、14KDa）を分離することができました。一方で高分子領域におけるバンド （45～200KDa）の移動度は大きくなりました。すなわち本品を使用するだけで、均一ゲルでもタンパク質の分析範囲が広がりプレキャストグラジエントゲルのような分離が可能となります。

 

 

■ウエスタンブロッティング

 

【β-Actinの検出】

電気泳動：	本品添加ゲル（10％ゲル） Laemmli法のゲル（12％ゲル）
サンプル：	1.Chemi-Lumi One Markers （製品番号 : 06456） 2.HeLa細胞タンパク質抽出液
転写：	PVDFメンブレン 10V、30min
ブロッキング：	Blocking One (製品番号:03953) 60min
１次反応：	抗β-アクチンモノクローナル抗体（マウス）（200倍希釈） 60min
２次反応：	抗マウスIgG〔H+L〕(ヤギ)，HRP標識（5000倍希釈) ＋Streptavidin（HRP Conjugate)(10000倍希釈）（製品番号:06456） 60min
検出：	Chemi-Lumi One Super（製品番号:02230）

※本品添加ゲルは従来のLaemmli法のゲルと同条件でウエスタンブロッティングに使用できます。

 

使用例

■銀染色（二次元電気泳動）

【サンプル】
HL-60細胞由来タンパク質

【電気泳動】
一次元：Immobiline™ pH 4-7
二次元：本品添加ゲル（12％ゲル）

【染色】
Sil-Best Stain One
（製品番号：06865）

Immobiline™はGE Healthcare社の商標です。

 

 

 

 

ゲル調製表

本表は、「40(w/v)％アクリルアミド/ビス混合液（29：1）（製品番号：06119）」または「40(w/v)％アクリルアミド/ビス混合液（37.5：1）（製品番号：06121）」を用いてSDS-PAGE用ポリアクリルアミドゲルを作製する場合のものです。

 

■分離ゲルの調製　　単位：ml

アクリルアミド濃度	液　名	10 ml	20 ml	30 ml	40 ml
６％	精製水	5.9	11.8	17.7	23.6
	40(w/v)% アクリルアミド/ビス混合液	1.5	3.0	4.5	6.0
	本品	2.5	5.0	7.5	10.0
	10(w/v)%ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液	0.1	0.2	0.3	0.4
	TEMED	0.008	0.016	0.024	0.032
８％	精製水	5.4	10.8	16.2	21.6
	40(w/v)% アクリルアミド/ビス混合液	2.0	4.0	6.0	8.0
	本品	2.5	5.0	7.5	10.0
	10(w/v)%ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液	0.1	0.2	0.3	0.4
	TEMED	0.006	0.012	0.018	0.024
１０％	精製水	4.9	9.8	14.7	19.6
	40(w/v)% アクリルアミド/ビス混合液	2.5	5.0	7.5	10.0
	本品	2.5	5.0	7.5	10.0
	10(w/v)%ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液	0.1	0.2	0.3	0.4
	TEMED	0.006	0.012	0.018	0.024
１２％	精製水	4.4	8.8	13.2	17.6
	40(w/v)% アクリルアミド/ビス混合液	3.0	6.0	9.0	12.0
	本品	2.5	5.0	7.5	10.0
	10(w/v)%ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液	0.1	0.2	0.3	0.4
	TEMED	0.006	0.012	0.018	0.024

 

 ■濃縮ゲルの調製　　単位：ml

アクリルアミド濃度	液　名	2 ml	4 ml	6 ml	8 ml
３％	精製水	1.33	2.66	3.99	5.32
	40(w/v)% アクリルアミド/ビス混合液	0.15	0.30	0.45	0.60
	本品	0.50	1.00	1.50	2.0
	10(w/v)%ペルオキソ二硫酸アンモニウム溶液	0.02	0.04	0.06	0.08
	TEMED	0.002	0.004	0.006	0.008

「30(w/v)％アクリルアミド/ビス混合液（29：1）（製品番号：06141）」または「30(w/v) ％アクリルアミド/ビス混合液（37.5：1）（製品番号：06144）」については、30(w/v)％アクリルアミド/ビス混合液用ゲル調製表の分離ゲル調製用緩衝液（4倍濃縮）（製品番号：30651）、濃縮ゲル調製用緩衝液（4倍濃縮）（製品番号：09267）を本品に置き代えてご使用下さい。

 

【分析条件】
ゲルサイズ：8cm×10cm×1mm(ミニゲル)
サンプル：タンパク質マーカー (製品番号：29458) (1X)
染色：CBB Stain One (製品番号：04543) 

 

 

 

ゲル強度

 

 

本品を添加すると、6％ゲルでもLaemmli法の10%ゲルに近い強度があり、
泳動後のゲルの取り扱いが容易になります。 

 

価格表 

製品名	規格	貯法	製品番号	容量	価格	買い物カゴへ
WIDE RANGE Gel Preparation Buffer (4x) for PAGE	SP	冷蔵	07831-94	250 ml	9,800

*本製品には、SDSは含有されていません。 

 

関連製品

製品名	毒劇区分	製品番号	容量	価格	買い物カゴへ
■ゲルの作製
40(w/v)% - Acrylamide/Bis Mixed Solution (29:1)	劇	06119-45	500 ml	11,000
40(w/v)% - Acrylamide/Bis Mixed Solution (37.5:1)	劇	06121-95	500 ml	11,000
30(w/v)% - Acrylamide/Bis Mixed Solution (29:1)	劇	06141-35	500 ml	9,500
30(w/v)% - Acrylamide/Bis Mixed Solution (37.5:1)	劇	06144-05	500 ml	9,500
10% - SDS Solution 〔10% - Sodium Lauryl Sulfate Solution〕		30562-04	100 ml	5,200
N,N,N',N' - Tetramethylethylenediamine		33401-72	25G	1,900
10(w/v)% - Ammonium Peroxodisulfate Solution		02634-34	10 ml	3,300
■電気泳動用バッファー
Running Buffer Solution (10x) for SDS - PAGE, Tris - Glycine		30329-61	1 L	5,500
■サンプル調製
Sample Buffer Solution with 2 - ME (2x) for SDS - PAGE	毒	30566-22	25 ml	5,100
Sample Buffer Solution without 2 - ME (2x) for SDS - PAGE		30567-12	25 ml	5,100
Sample Buffer Solution with Reducing Reagent (6x) for SDS - PAGE		09499-14	5 ml	5,200
Sample Buffer Solution without Reducing Reagent (6x) for SDS - PAGE		09500-64	5 ml	4,600
■ゲルの染色
Dispotray (for minigel staining)		06563-44	20 PIECES	2,000
Rapid Stain CBB Kit		30035-14	1 SET	7,500
CBB Stain One (Ready To Use)		04543-51	1 L	12,000
Sil - Best Stain One		06865-81	1 SET	9,500

※記載の内容は、'11年11月現在の情報に基づいております。