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ABD Bioquest社 蛍光カルシウムインジケーター
ABD Bioquest社は、ライフサイエンス研究に有用な蛍光、発光、発色系の色素を豊富に取扱うメーカーです。 今回は新しく開発された2種類の新規蛍光カルシウムインジケーターを紹介します。
Quest Fluo-8TMシリーズ
Quest Fluo-8TMシリーズは、従来の緑色蛍光カルシウムインジケーターFluo-4を改変した新しいインジケーター試薬です。
特長
- Fluo-8は、Fluo-4 AMの2倍、Fluo-3 AMの4倍の蛍光強度
- カルシウムイオンの結合により、蛍光強度が200倍程度変化するのでS/N比が高い
- アセトキシメチル体やカルシウムへの親和性の違いなど様々な製品ラインアップ
- 反応後の洗浄が不要なFluo-8 NWアッセイキットもご用意
- 室温使用が可能で、HTSに便利
製品概要
Quest Fluo-8TMシリーズの詳細
| インジケーター | カルシウムへの 親和性（Kd） | 検出波長（Ex/Em） | 検出機器 |
|---|---|---|---|
| Quest Fluo-8TM | 389 nM | 490 nm / 514 nm | FLIPRTM （Molecular Device） FDSS （浜松ホトニクス） BMG NovostarTM （BMG Labtech） |
| Quest Fluo-8HTM | 232 nM | ||
| Quest Fluo-8LTM | 1.86μM |
使用例
図1：96ウェルプレートに播種したU2OS細胞の培地を除去した後、Fluo-3 AM, Fluo-4 AM, Quest- Fluo-8TM AM (4μM in HHBS)を添加し37℃（5% CO2インキュベーター）で1時間インキュベーション、洗浄後、蛍光顕微鏡（Olympus IX71）にて観察しました。Fluo-8の蛍光強度の高さが実証されています。
参考データ
図2：96ウェルプレートに播種したHEK293細胞の培地を除去した後、Screen QuestTM Fluo-8 NW Calcium Assay Kit（Medium Removalタイプ）およびFluo-4 NW Kitに付属のFluo-8、Fluo-4溶液をそれぞれ調製、細胞に添加し37℃（5% CO2インキュベーター）で1時間インキュベーションしました。Fluo-8を用いたAssay Kitは、低濃度で作用し、高い蛍光強度を示すことが実証されています。
*)グラフ横軸は投与されたカルバコール濃度、縦軸は蛍光強度を示しています。
文献
Martin VV, Beierlein M, Morgan JL, Rothe A, Gee KR. Novel fluo-4 analogs for fluorescent calcium measurements. Cell Calcium, 36, 509. (2004)
価格表
| 製品名 | メーカー 製品番号 | 製品番号 | 容量 | 価格 |
|---|---|---|---|---|
| Quest Fluo-8TM, AM Cell-permeable | 21081 | 08486-04 | 5×50μg | 18,000 |
| 21082 | 08487-94 | 10×50μg | 34,000 | |
| Quest Fluo-8TM, sodium salt | 21088 | 17737-34 | 10×50μg | 28,000 |
| Quest Fluo-8HTM, AM Cell-permeable | 21091 | 17738-24 | 10×50μg | 37,000 |
| Quest Fluo-8LTM, AM Cell-permeable | 21097 | 17739-14 | 10×50μg | 37,000 |
| 関連製品 | ||||
| Screen QuestTM Fluo-8 NW Calcium Assay Kit Medium Removal |
36308 | 17742-70 | 1 kit (10 plates) |
48,000 |
| Screen QuestTM Fluo-8 NW Calcium Assay Kit 1% FBS Growth Medium |
36315 | 17743-60 | 1 kit (10 plates) |
47,000 |
貯法：-20℃
※掲載の内容は、'09年3月現在の情報に基づいております。
Quest Rhod-4TMシリーズ
Quest Rhod-4TMシリーズは、従来の赤色蛍光カルシウムインジケーターRhod-2を改変した新しいインジケーター試薬です。
特長
- Rhod-2の4倍の蛍光強度とダイナミックレンジを実現
- カルシウムイオンへの親和性を2倍向上
- ミトコンドリアへの集積を抑え、主に細胞質のカルシウムイオン濃度測定が可能
- 様々な波長で励起が可能
- 反応後の洗浄が不要なRhod-4 NWアッセイキットもご用意
製品概要
Quest Rhod-4TMＡＭとRhod-2 AMの比較
| インジケーター | カルシウムへの 親和性（Kd） | 検出波長 （Ex/Em） | 色素の主な局在性 |
|---|---|---|---|
| Quest Rhod-4TMAM | 525 nM | 530* nm / 555 nm | 細胞質 |
| Rhod-2 AM | 1μM | 549 nm / 578 nm | ミトコンドリア |
*)490nm、514nm、546nmにも十分な吸収を持ち励起・蛍光検出が可能です。
使用例
図3：96ウェルプレートに播種したU2OS細胞の培地を除去した後、Rhod-2 AM, Quest Rhod-4TM AMをそれぞれ最終濃度2μMとなるように添加し37℃（5% CO2インキュベーター）で1時間インキュベーション、洗浄後、蛍光顕微鏡（Olympus IX71）にて観察しました。Quest Rhod-4TM AMの蛍光強度の高さが実証されています。
参考データ
図4：96ウェルプレートに播種したHEK293細胞の培地を除去した後、Screen QuestTM Rhod-4 NW Assay Kit（Medium Removalタイプ）およびRhod-2 AMの溶液をそれぞれ調製、細胞に添加し37℃（5% CO2インキュベーター）で1時間インキュベーションしました。Rhod-4を用いたAssay Kitは、低濃度で作用し、高い蛍光強度とダイナミックレンジを示すことが実証されています。
*）グラフ横軸は投与されたカルバコール濃度、縦軸は蛍光強度を示しています。
*）励起/蛍光の検出条件：530nm/555nm
価格表
| 製品名 | メーカー 製品番号 | 製品番号 | 容量 | 価格 |
|---|---|---|---|---|
| Quest Rhod-4TM AM | 21121 | 17740-74 | 5×50μg | 28,000 |
| 21122 | 17740-16 | 10×50μg | 37,000 | |
| Quest Rhod-4TM, sodium salt | 21128 | 17741-64 | 5×50μg | 37,000 |
| 関連製品 | ||||
| Screen QuestTM Rhod-4 NW Calcium Assay Kit Medium Removal |
36331 | 17744-50 | 1 kit (10 plates) |
76,000 |
| Screen QuestTM Rhod-4 NW Calcium Assay Kit 1% FBS Growth Medium |
36334 | 17745-40 | 1 kit (10 plates) |
95,000 |
貯法：-20℃
※掲載の内容は、'09年3月現在の情報に基づいております。
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