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Biotium社　アポトーシス検出キットNucView™

 

 

 

 

アポトーシスに関与する活性化Caspase-3をリアルタイムで検出できるキットを2種類紹介します。

 

 

原理

NucView™ Caspase-3 Substrateは、蛍光DNA dyeとCaspase-3特異的基質DEVDから構成されています。本製品は、細胞膜透過性を有する非蛍光性の分子で、DNAへの親和性を有しません。しかし、アポトーシスによる活性化Caspase-3存在下においては、基質部位が分離されます。遊離したDNA dyeは、DNAとの親和性を生じ、複合体を形成した際は、鮮やかな緑色蛍光を発します。

 

 

NucView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for live cells 

特長

• 生細胞で観察が可能
• アポトーシスの進行を止めることなく観察が可能
• 同時にCaspase-3活性の検出と細胞核の染色が可能
• 操作はインキュベーションのみ
• 細胞を固定化後、多重染色も可能

 

 

使用例

スタウロスポリン誘導を行ったMDA-MB-231細胞を1μMのDEVD-NucView™ 488 Caspase-3と37℃で30分間インキュベーションした後、3.7%ホルムアルデヒドを用い固定化した。固定化した細胞は、透過処理を行った後、Sulforhodamine 101-phalloidin（Texas Red^®-phalloidin（#00033））で染色した。アポトーシスを起こした細胞の核のDNAは、酵素的にNucView™から遊離したDNA色素により緑色に染色される。一方、細胞骨格は、F-アクチン結合性のPhalloidinにより赤色に染色された。

 

１時間、2.5時間、5時間とさまざまなインキュベーション時間でスタウロスポリン処理した細胞をフローサイトメトリーにて検出。分析前に、誘導した細胞を本製品（10μM）と15分間インキュベーション。Caspase-3陽性細胞の割合を提示。
1時間：10%（図B）
2.5時間：80%（図C）
5時間：97%（図D）

 

 

キット構成

• NucView™ 488 Caspase-3 substrate, 0.2mM in DMSO（250μl×2）
• Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2mM in DMSO（20μl）

 

 

価格表

 

 

Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 substrate and sulforhodamine101-annexin Ⅴ

特長

• 複数の指標でアポトーシスを検出

NucView™によるCaspase-3活性の検出、核の形態変化の検出とSulforhodamine101-annexin Ⅴによる細胞膜上のホスファチジルセリンの検出が可能

• 生細胞で観察が可能
• アポトーシスの進行を止めることなく観察が可能
• 操作はインキュベーションのみ
• 細胞を固定化後、多重染色も可能 

 

 

使用例

アポトーシスが生じているJurkat細胞をsulforhodamine 101-annexin Ⅴ（Texas Red^®-annexin Ⅴ）とNucView™ 488 Caspase-3で染色。annexin Ⅴは細胞膜から露出しているホスファチジルセリンを赤色に染色し、NucView™ 488 Caspase-3は核を緑色に染色した。アポトーシスのステージの異なる細胞がそれぞれ検出されているデータを提示する（左右のデータ）。

 

 

キット構成 

• NucView™ 488 Caspase-3 substrate, 0.2mM in DMSO（250μl）
• Sulforhodamine 101-annexin Ⅴ, 50μg/ml in TE buffer containing 0.1% BSA and 0.1% NaN₃, pH7.5（250μl）
• Annexin Ⅴ binding buffer（10ml）
• Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2mM in DMSO（20μl）

 

 

価格表

 

※記載の内容は、'14年3月現在の情報に基づいております。