脂肪酸メチル化キット / メチル化脂肪酸精製キット

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脂肪酸メチル化キット / メチル化脂肪酸精製キット

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脂肪酸メチル化キット / メチル化脂肪酸精製キット

脂肪酸のガスクロマトグラフィー(GC)分析では、ピークのテーリングの防止や脂肪酸の揮発性を高めるためにエステル化の後に分析を行うことが一般的です。しかし、従来のエステル化法では特殊な装置を用いたり、熟練した操作を必要とします。
本法では、簡便で安全な新しい反応系と精製法を組み合わせることによって、誰にでも簡単に脂肪酸のメチルエステル化が可能となりましたので、ご紹介します。
本法で使用するキットは、経済産業省平成16年度地域新生コンソーシアム研究開発事業「ポストゲノム解析を簡便にする生体試料精密分画キットの開発」の成果に基づき製造しています。　(特許出願中：出願者京都府立大学大学院、月桂冠株式会社)

特長

遊離脂肪酸、グリセロ脂質、ステロールエステルの脂肪酸分析に
強熱不要で、温和な反応条件(37℃)
短鎖脂肪酸の検出も可能
揮発性成分の分析も可能
従来法より、安全・簡便にメチルエステル化が可能

分析対象

遊離脂肪酸
グリセロ脂質（トリグリセリド、りん脂質、糖脂質）
ステロールエステル（注）スフィンゴ脂質には適用できません

| 使用例1 | 使用例2 | 性能比較 | 定量性 | 使用手順 | 従来法 | サンプル例 | キット内容 | 価格表 |

使用例1

【データご提供：月桂冠株式会社総合研究所】

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使用例2

酵母の育種にあたって、酵母細胞内の物質量を正確に測定することが重要となります。
親株と比べ、セルレニン耐性株では、吟醸香のひとつであるカプロン酸が増加していることがわかります。

酵母細胞内の脂肪酸組成

【データーご提供：月桂冠株式会社　総合研究所】
URL：http://www.gekkeikan.co.jp/RD/research/new005.html

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性能比較

酵母細胞サンプルに対して、本法と従来法でメチル化を行った結果を、比較しました。
両者のメチル化率は脂肪酸の鎖長に関わらずほぼ同一となっています。

メチル化率の比較

【データご提供：月桂冠株式会社総合研究所】

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定量性

本法を用いて10mgから100mgの酵母乾燥菌体に含まれる総脂肪酸を測定した結果、菌体量と脂肪酸量は比例関係を示し、不純物の多いサンプルでも正確に脂肪酸の測定ができることが分かりました。

各サンプル量での定量性

【データご提供：月桂冠株式会社総合研究所】

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使用手順

従来法（下記）に比べ、温和な条件（反応温度低く、塩酸を使用しない）でメチル化できます。

詳細は製品添付文書をご覧ください。

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従来法

従来法ではサンプルを高温に加熱する必要があるため、多価不飽和脂肪酸やシクロプロパン脂肪酸など、不安定な脂肪酸の分解、低級脂肪酸アルキルエステルの蒸散消失などにより定量性が低下します。

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サンプル例

全脂質の脂肪酸組成分析の場合の乾燥サンプル例

サンプル例	処理等
大腸菌または酵母	容器に大腸菌または酵母の培養液を取り、遠心して得られたペレット約20ｍｇを凍結乾燥させたもの。大腸菌の場合は1-2時間減圧デシケータで乾燥させても良い。
血液	ヘパリン処理した血液0.04mlを抗酸化剤BHT処理濾紙に着点・吸収させ、30分間減圧デシケータで乾燥、または2時間以上自然乾燥させたもの。メチル化を完全に進行させるには、血液を濾紙全体に薄く塗る必要があります。［BHT処理濾紙の作成法］（BHT：2，6-di-t-butyl-p-cresol）0.05％BHTを含むアセトンに濾紙を数分間浸します。別の同組成のアセトンにもう一度浸したのち風乾し、さらに30分以上減圧乾燥または1晩デシケータで乾燥させた後、1.5cm角に切って使用します。濾紙はWhatman^® 3MMやADVANTEC社製No.2など。採血用濾紙などの厚手の濾紙はメチル化収率が低下するので使用しないでください。
ラット肝臓	ラット肝臓15mgを凍結乾燥させたもの。減圧デシケータによる乾燥は収率が低下するので使用しないでください。
食用油	4mg以下の食用油
きな粉	20mg以下のきな粉
魚	アジの可食肉質部　約200mgを小試験管に取り、抽出試薬2mlを加えてガラス棒で肉片を押しつぶします。ボルテックスで攪拌後、上澄み液0.5mlをメチル化に使用する容器に取ります。ロータリーエバポレーター、減圧デシケータ、またはN₂ガスを吹き付けて溶媒を蒸発させたものをサンプルとします。