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InvivoGen社 TLR / NOD リガンドスクリーニングサービス


InvivoGen社は、TLR、NODとそのシグナルの伝達に必要な遺伝子、レポーター遺伝子（SEAP）を導入した293細胞を保有しており、その 293細胞を利用し各種化合物に対するTLR、NODの認識の有無、アゴニスト・アンタゴニストとしての作用をスクリーニングするサービスを提供しています。

特長

  • 短い納期：スクリーニングにかかる時間はわずか2週間
  • 低コスト：サンプル数により、大幅なディスカウントを適用
| サービス内容 | 原理 | サービスの流れ | Q＆A |

サービス内容

TLR/NODスクリーニングサービスでは、以下の2つのサービスを提供しています。

  • Level 1：対象のリガンドがどのTLR、NODと反応するかを試験
  • Level 2：対象のリガンドが特定のTLRとどの濃度で反応するかを試験

通常Level 2は、Level 1を実施後に行われる場合が多いですが、Level 2から試験を開始することも可能です。

＜Level 1サービスの例＞ 2種類のサンプルをヒトTLR2、3、4、5、7、8、9に作用

図1. 293/hTLR-SEAPクローンパネルにおける、テスト化合物の評価。
Sample 1 はTLR7とTLR8に、Sample 2 はTLR7に反応している。

PRRs Controls Sample 1 Sample 2 NI
TLR2 2.968 0.111 0.111 0.095
TLR3 1.857 0.062 0.060 0.066
TLR4 2.287 0.284 0.277 0.183
TLR5 3.374 0.061 0.063 0.077
TLR7 1.921 2.373 2.332 0.096
TLR8 1.273 3.217 0.093 0.085
TLR9 2.320 0.129 0.129 0.172

＜Level 2サービスの例＞ 2種類のサンプルについてヒトTLR7に対する、4点の濃度で測定

図2. 選択したTLRにおける用量反応。
TLR7における用量反応。濃度1/1000において、Sample 1は反応しているが、Sample 2は反応していない。

リガンド＼濃度 1/10000 1/1000 1/100 1/10
Loxoribine 0.064 0.066 0.112 1.413
Sample1 0.995 2.138 2.062 1.557
Sample2 0.060 0.214 1.642 1.974
NI 0.082 0.082 0.082 0.082

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原理

ポジティブコントロール：サンプルと共に下記のポジティブコントロールを用いて試験します。

PRRs ポジティブコントロール 使用濃度 一般的に作用するリガンド
TLR2 Heat killed Listeria
monocytogenes		 108 cells/ml さまざまな細菌分子、
微生物由来成分
TLR3 Poly (I:C) 1 μg/ml 二本鎖RNA(dsRNA)
TLR4 LPS from
Escherichia coli K12		 100 ng/ml グラム陰性菌のLPSと
リピドA
TLR5 Flagellin from
Salmonella typhimurium		 100 ng/ml フラジェリン
TLR7 Imiquimod 3 μg/ml 一本鎖RNA(ssRNA)および
低分子抗ウイルス化合物
TLR8 CL075 10 μg/ml 一本鎖RNA(ssRNA)および
低分子抗ウイルス化合物
TLR9 CpG ODN 2006 10 μg/ml 特定の非メチル化CpG
オリゴヌクレオチド配列
NOD1 Tri-DAP 3 μg/ml ムロペプチド
NOD2 Muramyldipeptide 100 ng/ml ムラミルジペプチド

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サービスの流れ

1. TLR / NODリガンドスクリーニングサービス確認シート記入
指定の書類にご希望のサービス内容(ヒトまたはマウスTLR2、3、4、5、7、8、9およびNOD1、2から試験ご希望のTLR、NODを選択)、サンプル数、サンプル保存状況などの必要事項を連絡いただきます。

＜Level 1サービス内容＞

項目 対象数 試験内容
TLR・NOD 9種類 ヒトまたはマウスTLR2、3、4、5、7、8、9およびNOD1、2からご希望のサービスを実施。
化合物濃度 1点 サンプルの濃度は、提供時のリガンドストック液の1/10希釈、またはご指定いただいた濃度の1点で試験。
測定回数 2回 上記条件で2回測定、ポジティブコントロールについても1回測定

＜Level 2サービス内容＞

項目 対象数 試験内容
TLR・NOD 1あるいは2種類 ご指定された特定のTLR・NODに、候補化合物を作用。
化合物濃度 3点 基本サービスでは、サンプルの濃度は、提供のリガンドストック液の1/10、1/100、1/1000希釈またはご指定の濃度3点で試験。ご希望により3点以上の濃度での試験も可能。
測定回数 3回 上記条件で3回測定、ポジティブコントロールについても
1回測定。

2. InvivoGen社へ見積依頼
価格はご希望のサービス内容、サンプル数、サンプルの保存状況などにより異なります。
TLR/ NODリガンドスクリーニングサービス確認シートにより、InvivoGen社に見積を依頼することになります。
おおよその価格は以下の通りです。
Level 1：ヒトまたはマウスTLR2、3、4、5、7、8、9に候補化合物を作用した場合。
Level 2：1種類のPRRｓに候補化合物を作用した場合。

サンプル数 Level 1 Level 2(Level 1実施後) Level 2のみ
価格 1サンプル
当たりの価格		 価格 1サンプル
当たりの価格		 価格 1サンプル
当たりの価格
1 149,000～ 149,000～ 100,000～ 100,000～ 179,000～ 179,000～
10 630,000～ 63,000～ 830,000～ 83,000～ 910,000～ 91,000～
100 5,100,000～ 51,000～ 7,600,000～ 76,000～ 7,700,000～ 77,000～

サンプルの輸送費用は、別途発生します。またその金額は、サンプルの輸送条件、量により変動しますので、お問い合わせください。

3. 見積回答とご相談
見積回答により、相談させていただき、最終決定していただきます。

4. 決定

5. サンプル送付
サンプルは以下の条件で受け付けます。

  • 有機化合物、無機化合物、核酸、タンパク質などのいずれも可能。但し、病原性のないものに限ります。
  • ストック溶液の状態もしくは固体(水溶性化合物に限定)。
  • 冷凍、冷蔵、室温のいずれのサンプルにも対応可能。
  • サンプルの安全確認書が必要となります。

6. InvivoGen社での試験
100サンプル以下のサンプルの場合は、通常InvivoGen社にサンプルが到着後2週間程度で試験は終了します。
100サンプル以上の場合は、お問い合わせください。

7. 試験結果報告

  • 内容：試験結果をまとめたエクセルシートとその数値をグラフ化したデータが提供されます。（上記サービス内容の例を参照ください。）
  • 提供方法：基本的にはメールでの送付となりますが、CD-ROMでの提供も可能です。

その他の提供方法も可能な場合がありますので、ご希望がありましたら
サービス確認シートPDF1.5MBにご記入ください。

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Q＆A

1. 試験可能なTLRの種類について
Q：紙面記載のTLR2、 3、 4、 5、 7、 8、 9以外のTLRのスクリーニングサービスを希望することは可能ですか？
A：現在は提供できません。上記以外のTLRに関しては、ポジティブコントロールとなるリガンドの存在が未知であることに加え安定細胞株が現状では構築されていないことが理由として挙げられます。
2. ネガティブコントロールについて
Q：ネガティブコントロールは、本サービスに含まれていますか？
A：本サービスにネガティブコントロールは含まれていません。必要な場合、ご指定頂いたサンプル（例：溶媒のみなど）を用いて試験します。
なお、ネガティブコントロールも1サンプルとして費用が発生します。
3. サンプルの輸送について
Q：冷蔵、冷凍サンプルでも輸送可能ですか？
A：対応可能です。基本的には、出荷時に充分量のブルーアイスもしくはドライアイスを入れて出荷しますが、それ以上のサンプルのケアが必要な場合はご相談下さい。
4. サンプルの調製について
Q：サンプルが不安定なので、InvivoGen社でサンプル溶液を調製してもらうことは可能ですか？
A：可能です。サンプル出荷時に指定の溶媒を添付して頂けましたら、InvivoGen社にてサンプル溶液を調製します。また、溶媒の組成を指定して頂けましたら、InvivoGen社にて溶媒から調製することが可能な場合もあります。共に、別途料金が派生いたしますので、お問い合わせください。
5. InvivoGen社でのサンプル保管について
Q：Level 1の結果を確認した後、Level 2のサービスを受けたいと考えています。Level 2のサービスを受けるまで、サンプルをメーカーで預かってもらうことは可能でしょうか？
A：お申し込み時に指定頂けましたら、通常の室温、冷蔵、冷凍サンプルの保管は可能です。注意事項のあるサンプルの場合、事前にお知らせ頂けましたらInvivoGen社に保管の可否を確認いたします。

※掲載の内容は、'09年3月現在の情報に基づいております。

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