InvivoGen社
マイコプラズマの検出から予防・除去
マイコプラズマ汚染の問題点
- 実験データの信頼性を損なう恐れ
- 大切な培養細胞のDNA・RNA・タンパク質合成への影響や染色体の変異を誘発
- 培養液に明確な変化を引き起こさないため、汚染の継続・拡大が進む
このようにマイコプラズマによるコンタミネーションは哺乳類細胞を培養する上で重大な問題となっています。
今回、InvivoGen社が販売しているマイコプラズマの検出試薬、感染予防・除去に関連する製品を紹介します。
■ Normocin™：マイコプラズマ、細菌、真菌感染の予防
■ Primocin™：初代培養細胞用のマイコプラズマ、細菌、真菌感染からの予防
■ マイコプラズマ除去試薬に関する FAQ（よくあるご質問）
Plasmocin™-マイコプラズマ予防・除去試薬
Plasmocin™は、非常に好評をいただいているマイコプラズマ予防・除去試薬です。Plasmocin™は、マイコプラズマに作用する強力な2種類の殺菌成分を含有しており、一方はタンパク質合成に作用し、他方はDNA複製に作用します。これら二つの特異的かつ独立したターゲットは、マイコプラズマや他の多くの細菌にのみ見られるもので、真核細胞には全く存在しません。
特長
- 2週間でマイコプラズマを除去（Treatment）、マイコプラズマ感染の予防可能（Prophylactic）
- 細胞内在性のマイコプラズマも除去
- 動物細胞には作用せず、細胞毒性なし
- 細胞の代謝への影響は認められない
- 耐性マイコプラズマが出現しにくい
- ES細胞・ハイブリドーマ・レトロウイルスパッケージング細胞でも処理実績あり
推奨使用濃度・使用方法
Plasmocin™ Treatment（マイコプラズマ除去用）
推奨使用濃度：25μg/ml（本品1mlで1Lの培地が調製できます。）
使用方法：
①細胞分裂の活発な細胞を12.5-37.5μg/mlのPlasmocin™を含む培地に分注します。
②3-4日に一度、新しい培地に交換します（処理期間2週間）。
③マイコプラズマフリーの状態を保持するためには、5μg/mlの濃度でPlasmocin™を添加し続けてください。
（注意）もし2週間処理した後でも除去が不十分だった場合は、37.5μg/mlで引き続き処理してください。
Plasmocin™ Prophylactic（感染予防用）
推奨使用濃度：2.5～ 5μg/ml（本品1mlで500ml～1Lの培地が調製できます。）
使用方法：
Plasmocin™を細胞培養用培地に添加してください。
作用ターゲット
- DNA Gyrase
- リボソームの50Sサブユニット
価格表
| 製品名 | 製品 濃度 | メーカー 製品番号 | 製品 番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|---|
| Plasmocin™ (Treatment) |
25mg/ml | ant-mpt | 25993-11 | 50 mg (2x1 ml) |
 |
| Plasmocin™ (Prophylactic) |
2.5mg/ml | ant-mpp | 25994-01 | 25 mg (10x1 ml) |
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Normocin™-マイコプラズマ、細菌、真菌感染予防試薬
Normocin™はマイコプラズマ、細菌および真菌に対して活性のある3種類の抗生物質を配合した革新的な抗菌剤です。
特長
- マイコプラズマ、細菌、真菌に作用
- 使用条件下で培養細胞の代謝への影響なし
- 他の抗菌剤と併用可能
推奨使用濃度
100μg/ml（本品1mlで500mlの培地が調製できます。）
作用ターゲット
- 原核生物：DNA Gyrase，リボソームの50Sサブユニット
- 真菌：細胞膜を介したイオン交換
価格表
| 製品名 | 製品 濃度 | メーカー 製品番号 | 製品 番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|---|
| Normocin™ | 50mg/ml | ant-nr-1 | 14858-44 | 500 mg (10x1 ml) |
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| ant-nr-2 | 14858-86 | 1 g (1x20 ml) |
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Primocin™-初代培養細胞用のマイコプラズマ、細菌、真菌感染予防試薬
Primocin™は培養時のコンタミネーションから初代培養細胞を守るために特別に設計された新しい抗菌剤です。 特に解剖の際のコンタミネーションや動物内在性のマイコプラズマから守ります。
特長
- マイコプラズマ、細菌、真菌に作用
- 初代培養細胞に毒性なし
- 他の抗菌剤は不要
推奨使用濃度
100µg/ml（本品1mlで500mlの培地が調製できます。）
作用ターゲット
- 原核生物：DNA Gyrase，リボソームの30S、50Sサブユニット
- 真菌：エルゴステロール
価格表
| 製品名 | 製品 濃度 | メーカー 製品番号 | 製品 番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|---|
| Primocin™ | 50mg/ml | ant-pm-1 | 14860-65 | 500 mg (10x1 ml) |
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| ant-pm-2 | 14860-81 |
1 g |
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Plasmocure™-マイコプラズマ除去試薬
非常に稀なケースですが、Plasmocin™に耐性のマイコプラズマが報告されています。これらの耐性マイコプラズマを除去するために、InvivoGen社はPlasmocure™を開発しました。本製品はPlasmocin™とは異なるメカニズムでマイコプラズマに作用する2種類の抗生物質を含有しています。
特長
- Plasmocin™に耐性のマイコプラズマを除去可能
- セルラインに対して微弱な毒性示すが十分な回復期待
推奨使用濃度
50µg/ml（本品1mlで2Lの培地が調製できます。）
作用ターゲット
- Isoleusyl Synthetase
- リボソームの50Sサブユニット
価格表
| 製品名 | 製品 濃度 | メーカー 製品番号 | 製品 番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|---|
| Plasmocure™ | 100mg/ml | ant-pc | 17837-24 | 100 mg (1x1 ml) |
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PlasmoTest™-マイコプラズマ検出キット
従来、マイコプラズマによるコンタミネーションを確かめるには特殊な技術を用いて、定期的に試験を行うほかありませんでした。InvivoGen社が開発したPlasmoTest™は初の人工的に改変された細胞を用いるマイコプラズマ検出キットであり、そのため研究室内で日常的な方法として簡単に確立することができます。
特長
- 簡単：特別な装置等は不必要で、基本的な細胞培養知識があればOK
- 迅速：実質的な操作時間は1 時間以内－オーバーナイトインキュベーション後に検出
- 多用途：細胞培養液に感染することでマイコプラズマやアコレプラズマ全種を検出可能
- 高感度：5×102-5×105cfu/ml のマイコプラズマを検出可能
- キット構成：ポジコンおよびネガコンを含むアッセイに必要となる全試薬を含む
使用方法
- 細胞培養している培地上清を500μlとり、チューブへ移す。
- サンプルを100℃、15分間加熱する。
- HEK-Blue™ Detection培地を50mlのHEK-Blue™ waterに粉末を溶して調製する。
- 96ウェルプレートにサンプルを50μlずつ入れる。
- 96ウェルプレートにそれぞれのコントロールを50μlずつ入れる。
- HEK-Blue™ Detection培地でHEK-Blue™-2cell懸濁液を調製する。
- 200μl（～50,000個の細胞）の細胞懸濁液をサンプルまたはコントロールが入っているウェルに添加する。
- プレートを37℃のCO2インキュベ ーターで一昼夜（16-24時間）培養する。
- 肉眼または620-655nmの分光計でマイコプラズマの有無を検出する。
キット構成
| rep-pt1 (250samples) |
|
| HEK-Blue™-2cells | 3-5×106 cells |
| HEK-Blue™ Selection(250×) | 2×1ml |
|
Normocin™(500×) |
1ml |
| HEK-Blue™ Detection | 1pouch |
| HEK-Blue™ water(60ml) | 1 |
| Positive control（死滅しているマイコプラズマ） | 1 tube |
| Negative control | 1 tube |
価格表
| 製品名 | メーカー 製品番号 | 製品 番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|
| PlasmoTest™ 劇 |
rep-pt1 | 17838-14 | 1 kit (250 samples) |
|
| HEK-Blue™ Selection 劇 |
hb-sel | 61428-01 | 10x1 ml | |
| Normocin™ | ant-nr-1 | 14858-44 | 500 mg (10x1 ml) |
|
| HEK-Blue™ Detection |
hb-det2 | 61419-34 | 5 pouches | |
| PlasmoTest™ Controls |
pt-ctr2 | 61464-34 | 200 tests | |
マイコプラズマ除去試薬に関する FAQ(よくあるご質問)
| Q1 | どのような細胞で処理実績がありますか？ |
|---|---|
| A1 | 下記に処理実績のある一部の細胞を掲載します。 Human Cell Lines：HEK293、HeLa、Colo357、HL60、HSB2、MCF-7、PC3、Hep-G2、MDA-MB231、SW13、SW620、T47D、U-373、U-87 Rodent Cell Lines：235-1、NIH3T3、B16、CHO、CT60、PC12、C2C12、C6、ES Cells その他：Hybridomas、Retrovirus Packaging Cell Line、Bi-color damselfish Cell Lines |
| Q2 | 動物細胞に対して毒性はありますか？ |
| A2 | Plasmocin™はマイコプラズマと多くの細菌だけをターゲットとして作用します。細胞に高濃度のPlasmocin™を作用させている場合、細胞の成長率が減速するかもしれませんが、培養液からPlasmocin™を除くと、すぐに正常な成長率に戻ります。 |
| Q3 | ペニシリン/ストレプトマイシンを添加した培養液にPlasmocin™、Normocin™、Primocin™を添加できますか？ |
| A3 | Plasmocin™、Normocin™はペニシリン/ストレプトマイシン溶液と互換性があります。ペニシリン/ストレプトマイシンと同時に添加することで、抗菌活性スペクトルを広げることができます。初代培養細胞用のPrimocin™についてはペニシリン/ストレプトマイシンを添加する必要はありません。 |
| Q4 | 選択用抗生物質存在下でも使用できますか？ |
| A4 | G418、Zeocin™、Hygromycin B、Blasticidin S、Puromycinなどの一般的な選択用抗生物質と互換性があり、同時に使用できます。 |
| Q5 | 耐性マイコプラズマの出現リスクはありますか？ |
| A5 | 耐性菌の存在を確認するために、繰り返し変異の生じる割合を測定しましたが、培養液中に耐性菌は全く出現しませんでした。従って、本製品に対する耐性マイコプラズマは実質的に出現しないと考えられます。もしPlasmocin™耐性マイコプラズマの出現が懸念される場合はPlasmocure™をご使用ください。 |
| Q6 | 昆虫細胞でも使用できますか？ |
| A6 | 哺乳動物細胞と同様のプロトコール（推奨濃度25µg/mlで2週間）でマイコプラズマを除去できます。至適濃度につきましては、50%の範囲で増減（12.5µg/ml～37.5µg/ml）させてお試しください。 |
| Q7 | ウイルスパッケージング細胞でも使用できますか？ |
| A7 | 同様のプロトコールで使用できます。ウイルス生産前のパッケージング細胞からのマイコプラズマ除去であれば除去用のPlasmocin™ Treatment、ウイルス生産の間であればPlasmocin™ ProphylacticまたはNormocin™をご使用ください。 |
| Q8 | tet調節発現系細胞でも使用できますか？ |
| A8 | Plasmocin™はテトラサイクリン・ファミリーに属しませんので、問題なく使用できます。 |
※記載の内容は、'16年11月現在の情報に基づいております。
