シスプラチン（CDDP）は水溶液中では mono-chloro 体、水和錯体、および OH-ダイマーの形で存在し、平衡状態を形成していると考えられています（図 1）。今回、水溶液中の CDDP とその mono-chloro 体、水和錯体、および OH-ダイマーの分離定量を行いました。

図 1. シスプラチン（CDDP）水溶液中の平衡反応
CDDP は溶液内で、Cl^- が外れ H₂O が置換します。また、pH の影響により OH^- に置換されます。さらに Cl^- がもう一つ外れることで、二つの水が置換されます。同様に、pH の影響で H₂O 、OH^- 、二つの OH^- が置換した構造になりこれらが平衡状態になっています。

同一条件下での C₁₈ カラム、コスモシール Cholester と πNAP カラムとのクロマトグラム比較例

OH-ダイマー硝酸体を測定した際に、OH-ダイマーのピークより前に解離した NO₃^- のピークが出現ます。C₁₈ カラム、コレステリル基を有する Cholester、ナフチルエチル基を有する πNAP を用いて分析しました。 C₁₈-MS-Ⅱでは両ピークを分離することができず、Cholester では OH-ダイマーと NO₃^- の 2 本のピークが認められましたが、完全に分離することができませんでした。一方、πNAP カラムでは完全に分離することができました。

分析条件
カラム	COSMOSIL **	検　出	UV 225 nm
カラムサイズ	4.6 mmI.D. × 250 mm	サンプル	Cisplatin OH-dimer nitrate(2 mmol/L) Nitrate Cisplatin OH-dimer
移動相	100 mmol/L NaClO4 / Acetonitrile / 100 mmol/L HClO4 mmol/L = 290 / 10 / 3
流　速	1.0 mL/min
温　度	37℃	注入量	20 µL
Data courtesy of Ryuji Kato, Ph D.,Laboratory of Cardiovascular Pharmacotherapy and Toxicology,Osaka University of Pharmaceutical Sciences

コスモシール πNAP カラムを用いた分析

下図のようなクロマトグラムとなり、ピークの分離状態は良好な結果が得られました。シスプラチン（CDDP）に関しては 0.01 ～ 4 mM の範囲で検量線は直線性を示し、日内変動および日間変動の CV 値は 5% 以内でした。

(下記画像をクリックすると拡大します)

分析条件
カラム	COSMOSIL **	検　出	UV 225 nm
カラムサイズ	4.6 mmI.D. × 250 mm	サンプル	Cisplatin (5 mmol/L) Di-chloro form Mono-chloro form OH-dimer form None-chloro form
移動相	100 mmol/L NaClO4 / Acetonitrile / 100 mmol/L HClO4 mmol/L = 290 / 10 / 3
流　速	1.0 mL/min
温　度	37℃	注入量	20 µL
Data courtesy of Ryuji Kato, Ph D.,Laboratory of Cardiovascular Pharmacotherapy and Toxicology,Osaka University of Pharmaceutical Sciences

コスモシール πNAP カラムを用いることで、HPLC 法によるシスプラチン（CDDP）とその mono-chloro 体、水和錯体、および OH-ダイマーの分離測定法が可能となりました。

Kato R. et al. A Novel Analytical Method of Cisplatin Using the HPLC with a Naphthylethyl Group Bonded with Silica Gel (πNAP) Column. Biol Pharm Bull. 40(3), 290-296(2017).