Arg-SEC Mobile Phase シリーズとは

Arg-SEC Mobile Phase シリーズは、水系 SEC での非特異的な保持や吸着を抑制するために開発された、プレミックスタイプの移動相です。抑制効果の異なる 3 種類をラインアップしています。

Activin A は、ES 細胞や iPS 細胞の培養に用いられるタンパク質です。その用途から、なるべく純度の高いものの使用が望ましいと考えられています。

分析条件
カラム	TSKgel G3000SWXL, 7.8 mmI.D.-300 mm	検　出	UV 280 nm
移動相	**	サンプル	Activin A (0.1 mg/mL)
流　速	1.0 mL/min	注入量	10 µL
温　度	30℃

* Phosphate Buffer (pH 6.8)
0.1 mol/L Sodium Dihydrogen Phosphate, 0.2 mol/L Sodium Chloride, pH 6.8 with Sodium Hydroxide

TSKgel^® は東ソ－株式会社の登録商標です。

結果と考察

りん酸緩衝液（pH 6.8）ではサンプルが浸透限界付近にまとまって溶出し、Activin A は分離しませんでした。移動相の溶出力が強くなるにつれてサンプルと充填剤との相互作用がなくなり、Activin A のピークの溶出が早くなりました。Arg-SEC Mobile Phase(Strong)では、10 分付近に Activin A のピークが溶出し、最も良い分離を示しました。 Activin A は、4 種類の移動相において Arg-SEC Mobile Phase(Strong)での分析が最も適していることがわかりました。

basic-FGF（b-FGF）は塩基性であるため、弱酸性であるシリカゲル表面に保持されやすいタンパク質です。

分析条件
カラム	COSMOSIL 5Diol-300-II, 7.5 mmI.D.-300 mm	検　出	UV 230 nm
移動相	**	サンプル	b-FGF (0.3 mg/mL)
流　速	1.0 mL/min	注入量	20 µL
温　度	30℃

* Phosphate Buffer (pH 6.8)
0.1 mol/L Sodium Dihydrogen Phosphate, 0.2 mol/L Sodium Chloride, pH 6.8 with Sodium Hydroxide

結果と考察

りん酸緩衝液（pH 6.8）では充填剤にタンパク質が保持されてしまい、サンプルが浸透限界付近にまとまって溶出し、b-FGF のピークは分離しませんでした。Arg-SEC Mobile Phase(Strong)では、排除限界を過ぎた後の 7 分付近から 10 分付近にわたってサンプルの溶出が続きました。移動相の溶出力が強いため、充填剤に保持されずに溶出したと考えられます。
b-FGF は、りん酸緩衝液（pH 6.8）よりも Arg-SEC Mobile Phase(Strong)での分析が適していることがわかりました。