④ 移動相の調製方法
1. 有機溶媒と水混合の移動相
（例）メタノール／水=70／30 (v/v) 1L
特別に表記がない場合には、体積比（V/V）によって移動相を調製します。
①メタノール700 mLをメスシリンダーに量りとる。
②蒸留水300 mLを別のメスシリンダーに量りとる。
③ ①②を十分に混合した後、脱気を行う。
（注）溶媒の体積は温度によって変化するため、精密性・再現性をよく量るためには、容量を比重換算した重量で計量し調製します。下表にその調製例を示します。
メタノール／水 移動相 1 L の組成表
| メタノール／水 | メタノール(g) | 蒸留水(g) |
|---|---|---|
| 90/10(v/v) | 711.9 | 99.8 |
| 80/20(v/v) | 632.8 | 199.6 |
| 70/30(v/v) | 553.7 | 299.5 |
| 60/40(v/v) | 474.6 | 399.3 |
| 50/50(v/v) | 395.5 | 499.1 |
| 40/60(v/v) | 316.4 | 598.9 |
| 30/70(v/v) | 237.3 | 698.7 |
| 20/80(v/v) | 158.2 | 798.6 |
| 10/90(v/v) | 79.1 | 898.4 |
アセトニトリル／水 移動相 1 L の組成表
| アセトニトリル／水 | アセトニトリル(g) | 蒸留水(g) |
|---|---|---|
| 90/10(v/v) | 707.4 | 99.8 |
| 80/20(v/v) | 628.8 | 199.6 |
| 70/30(v/v) | 550.2 | 299.5 |
| 60/40(v/v) | 471.6 | 399.3 |
| 50/50(v/v) | 393.0 | 499.1 |
| 40/60(v/v) | 314.4 | 598.9 |
| 30/70(v/v) | 235.8 | 698.7 |
| 20/80(v/v) | 157.2 | 798.6 |
| 10/90(v/v) | 78.6 | 898.4 |
注意：メタノール､アセトニトリルは医薬用外劇物です。取扱いは手袋･保護メガネ･マスクを着用し、ドラフト内で行ってください。
移動相の有機溶媒濃度の違いに対する保持時間の変化
メタノール濃度が1%違うだけで保持時間は大きく変わります。移動相は正確に調製してください。
| 分析条件 | |||
|---|---|---|---|
| カラム | 5C18-MS-II 4.6 mmI.D.-150 mm | 温度 | 30℃ |
| 流速 | 1.0 mL/min | サンプル |
|
| 検出 | UV254 nm 0.16 AUFS | ||
2. 緩衝液の調製方法
（例1）20 mmol/Lりん酸緩衝液(pH 2.5)の調製方法
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①20 mmol/Lりん酸二水素ナトリウム水溶液を調製する。
（1 Lのメスフラスコに#31720-65 りん酸二水素ナトリウム（無水）2.40 gを量りとり、蒸留水で1 Lにメスアップする）
②20 mmol/Lりん酸水溶液を調製する。（１Lのメスフラスコに#08964-92 りん酸（純度85%）2.31 gを量りとり、蒸留水で1 Lにメスアップする）
③pHメーターで測定しながら、pH 2.5になるように①と②を混合する。
④ミリカップ-HV (0.45 µm)(#44054-89)で、バッファーを減圧ろ過する。
（注）塩類は不溶性固体を含有している場合があり、送液ポンプのシールの劣化や、カラムの詰まりの原因になるので必ずろ過してください。
⑤有機溶媒と混合する場合には「1. 有機溶媒と水混合の移動相」の例と同様に体積比で混合してください。
（注）混合時に塩が析出していないか確認してください。時間経過後、析出する場合もあります。
調製済みの緩衝液〔#08969-71 りん酸緩衝液（pH 2.5）（5倍濃縮）〕を販売していますのでご利用ください。
（例2）20 mmol/L りん酸緩衝液（pH 7.0）の調製方法
① 20 mmol/Lりん酸二水素ナトリウム水溶液を調製する。。
（1 Lのメスフラスコに#31720-65 りん酸二水素ナトリウム（無水）2.40 gを量りとり、蒸留水で1 Lにメスアップする）
② 20 mmol/Lりん酸水素二ナトリウム水溶液を調製する。（1 Lのメスフラスコに#31801-05 りん酸水素二ナトリウム2.84 gを量りとり、蒸留水で1 Lにメスアップする）
③pHメーターで測定しながら、pH 7.0になるように①と②を混合する。
④ミリカップ-HV (0.45 µm)(#44054-89)で、バッファーを減圧ろ過する。
（注）塩類は不溶性固体を含有している場合があり、送液ポンプのシールの劣化や、カラムの詰まりの原因になるので必ずろ過してください。
⑤有機溶媒と混合する場合には「1. 有機溶媒と水混合の移動相」の例と同様に体積比で混合してください。
（注）混合時に塩が析出していないか確認してください。時間経過後、析出する場合もあります。
調製済みの緩衝液〔#08968-81 りん酸緩衝液（pH 7.0）（5倍濃縮）〕を販売していますのでご利用ください。
（例3）5 mmol/L 1-へキサンスルホン酸ナトリウム，20 mmol/Lりん酸緩衝液（pH2.5）の調製方法
① 5 mmol/L 1-へキサンスルホン酸ナトリウム、20 mmol/Lりん酸二水素ナトリウム水溶液を調製する。
（1 Lのメスフラスコに、#31529-24 1-へキサンスルホン酸ナトリウム 0.94 g と#31720-65 りん酸二水素ナトリウム（無水）2.40 gを量りとり、蒸留水で1 Lにメスアップする）
②5 mmoI/L 1-へキサンスルホン酸ナトリウム、20 mmol/Lりん酸水溶液を調製する。
（1 Lのメスフラスコに、#31529-24 1-へキサンスルホン酸ナトリウム 0.94 gと#08964-92 りん酸（純度85%）2.31 gを量りとり、蒸留水で1 Lにメスアップする）
③ pHメーターで測定しながら、pH 2.5になるように①と②を混合する。
④ミリカップ-HV (0.45 µm)(#44054-89)で、バッファーを減圧ろ過する。
（注）塩類は不溶性固体を含有している場合があり、送液ポンプのシールの劣化や、カラムの詰まりの原因になるので必ずろ過してください。
⑤有機溶媒と混合する場合には「1. 有機溶媒と水混合の移動相」の例と同様に体積比で混合してください。
（注）混合時に塩が析出していないか確認してください。時間経過後、析出する場合もあります。
