COSMOSIL PBr
- ペンタブロモベンジル基結合型
- 親水性化合物を逆相クロマトグラフィーで分離
適合するサンプル例
- 親水性化合物
- ヌクレオチド、ペプチド、カテコールアミン、オリゴ糖など
製品説明
C18 カラムとの比較
コスモシール PBr は、ペンタブロモベンジル基のもたらす効果によって、C18 カラムでは保持が小さい親水性化合物を長く保持し、分離することができます。
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column size | 4.6 mm I.D. × 250 mm | Sample |
|
Mobilephase | 100 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0) | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | UV 260 nm | Inj. Vol. | 1.0 µL |
HILIC カラムとの比較
HILIC カラムは、親水性化合物を分析できる手法として注目されていますが、逆相カラムとは全く異なる分離特性から、分析条件設定が煩雑になる場合があります。また、移動相に高濃度のアセトニトリルを使用するため、移動相よりも溶出力の強い水を多量に注入するとサンプル容量以上にサンプルの拡散がおこりピーク形状が乱れるという難点があります。一方、コスモシール PBr は、C18 カラムと同様の逆相クロマトグラフィーでの分析条件設定が可能であり、移動相よりも溶出力の弱い水を大量に注入してもサンプルが拡散することなくピーク形状は乱れません。
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column size | 4.6 mm I.D. × 150 mm | Sample |
|
Mobilephase | HILIC:Acetonitrile / H2O = 90 / 10 PBr:H2O |
||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | UV 260 nm | Sam. solution | H2O |
分離機構
逆相クロマトグラフィーでは、上側のクロマトグラム(①)のように化合物の疎水性の差(CH2 基の数の差)を識別し分離することができます。一方、下側のクロマトグラム(②)のように疎水性に差がない(OCH2CH2 基の数の差)場合、C18 カラムでは保持時間の差がほとんどありませんが、コスモシール PBr ではペンタブロモベンジル基がもつ分散力効果により分離が可能となります。
①疎水性に差がある化合物
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column size | 4.6 mm I.D. × 150 mm | Sample |
|
Mobilephase | Methanol / H2O = 80 / 20 | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | UV 254 nm |
②疎水性に差がない化合物
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column size | 4.6 mm I.D. × 150 mm | Sample |
|
Mobilephase | Methanol/ H2O = 60 / 40 | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | UV 254 nm |
■分散力とは?
一般的に中性分子(無極性分子)には電荷の偏りはありません。しかし電子は絶え間なく動いており、瞬間的な状態をみると電荷の偏りが生じて分極していると見なすことができます。この一時的な電気双極子間の引力によって生じる弱い分子間力が"分散力"と呼ばれます。
■分散力が大きい化合物の一例
- 鎖長の増加など分子量が増加するような化合物
- 原子半径が大きい置換基を持つ化合物 (例:ハロゲン置換体)
- 電子の動きが活発な化合物 (例:芳香族化合物) ↓ コスモシール PBr は固定相の 5 個の臭素原子によって大きな分散力を示すため、化合物の分散力の差を認識して高い選択性を示します。
連続分析
水 100% の移動相中で 1,000 回連続分析をしたところ、安定した分析結果が得られました。
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column | COSMOSIL PBr 4.6 mm I.D. × 150 mm | Sample |
|
Mobilephase | 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 2.5) | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 40℃ | ||
Detection | UV 280 nm | Inj. Vol. | 1.0 µL |
PFP カラムとの比較
さまざまなメーカーで販売されているペンタフルオロフェニルカラム(PFP カラム)と、ナカライテスク独自のペンタブロモフェニルカラム(コスモシール PBr)は、どちらも「ベンゼン環にハロゲン原子が 5 つ結合した固定相構造」であるため、分離特性も 似通ったものだと捉えがちです。しかし実際は、両者の分離特性は大きく異なり、それぞれ特徴的な分離が実現可能です。
共通点と相違点
PFP | PBr |
---|---|
相互作用の差による保持の違い
|
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column size | 4.6 mm I.D. × 150 mm | Detection | UV 254 nm |
Mobilephase | PFP:Methanol / H2O = 60 / 40 PBr:Methanol / H2O = 70 / 30 |
Sample | |
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ |
詳細はこちらをご覧ください。保持原理と実際の分離例の両面から紹介しています。
製品使用例
コスモシール PBr での分離適用化合物
疎水性の小さな親水性化合物は C18 カラムでは保持が小さいですが、コスモシール PBr では分散力の働きにより保持されます。環式化合物やアミド化合物に対して、コスモシール PBr は C18 カラムよりも大きな保持を与えます。コスモシール PBr でも保持がない化合物にはイオンペア試薬、HILIC カラム、誘導体化などのご使用をお薦めします。
(移動相)
(1) Methanol / 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0) = 10 / 90
(2) 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 2.5)
(3) 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0)
(4) Methanol / H2O = 10 / 90
分析例 1
カテコールアミン
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column | COSMOSIL PBr 4.6 mm I.D. × 150 mm | Sample |
|
Mobilephase | 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 2.5) | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Tempera ture | 30℃ | ||
Detection | UV 280 nm | Inj. Vol. | 1.0 µL |
ウラシル誘導体
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column | COSMOSIL PBr 4.6 mm I.D. × 150 mm | Sample |
|
Mobilephase | 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 2.5) | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | UV 210 nm | Inj. Vol. | 10 µL |
オリゴペプチド
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column | COSMOSIL PBr 4.6 mm I.D. × 250 mm | Sample |
|
Mobile phase | 0.1% TFA-H2O | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | UV 220 nm | Inj. Vol. | 1.0 µL |
分析例 2
グルタチオン
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column | COSMOSIL PBr 4.6 mm I.D. × 150 mm | Sample |
|
Mobilephase | 0.1% TFA-Acetonitrile / H2O = 5 / 95 | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | UV 220 nm | Inj. Vol. | 1.5 µL |
オリゴ糖
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column | COSMOSIL PBr 4.6 mm I.D. × 150 mm | Sample | Fructooligosaccharides (50 mg/mL)
|
Mobile phase | A; H2O B; Acetonitrile B conc. 2 → 10% 10 min Linear gradient |
||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | ELSD | Inj. Vol. | 0.5 µL |
メラミン
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column | COSMOSIL PBr 4.6 mm I.D. × 250 mm | Sample |
|
Mobilephase | 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0) | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Temperature | 30℃ | ||
Detection | UV 225 nm | Inj. Vol. | 1.0 µL |
親水性化合物以外への適応
界面活性剤
コスモシール PBr は、C18 カラムや PFP カラムなどと分離特性が違うことから、分離が難しい化合物を分離することができます。
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column size | 4.6 mm I.D. × 150 mm | Detection | UV 254 nm |
Mobilephase | 5C18-MS-II, 5PFP:Methanol / H2O = 80 / 20 5PBr:Methanol | Sample | Triton® X-100 (50 mg/mL) |
Sample | 1.0 mL/min | Inj. Vol. | 2.0 µL |
Tempera ture | 30℃ |
Triton® はユニオン・カーバイド・コーポレーションの登録商標です。 |
ハロゲン化合物
ハロゲン化合物に対し、コスモシール PBr は高い選択性を示しています。
Conditions | |||
---|---|---|---|
Column size | 4.6 mm I.D. × 150mm | Sample |
|
Mobilephase | Methanol / H2O = 65 / 35 | ||
Flow rate | 1.0 mL/min | ||
Tempera ture | 30℃ | ||
Detection | UV 254 nm | Inj. Vol. | 1.0 µL |
関連資料
価格表
分析・分取カラム(粒子径 5 µm)
COSMOSIL PBr
ガードカートリッジカラム(2 個入り)。使用には、*1 は内径 2.0 mm 用 ガードカートリッジホルダー(別売 #11884-71)、*2 は内径 4.6 mm 用 ダイレクトカートリッジホルダー(別売#19989-71)が必要です。
分析カラム(粒子径 3 µm)
COSMOSIL 3PBr
ガードカートリッジカラム(2 個入り)。使用には、*1 は内径 2.0 mm 用 ガードカートリッジホルダー(別売 #11884-71)、*2 は内径 4.6 mm 用 ダイレクトカートリッジホルダー(別売#19989-71)が必要です。
※上記以外のカラムサイズをご要望の際はお問い合わせください。
関連製品
※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。