PBr

特長

ペンタブロモベンジル基結合型
親水性化合物を逆相クロマトグラフィーで分離

適合するサンプル例

親水性化合物
ヌクレオチド、ペプチド、カテコールアミン、オリゴ糖など

製品説明
使用例
関連資料
価格表

製品説明

C₁₈ カラムとの比較

コスモシール PBr は、ペンタブロモベンジル基のもたらす効果によって、C₁₈ カラムでは保持が小さい親水性化合物を長く保持し、分離することができます。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 250 mm	Sample	Uridine-5'-diphosphate (0.8 mg/mL) Uridine-5'-diphosphogalactose (0.8 mg/mL) Uridine-5'-diphosphoglucose (0.8 mg/mL)
Mobilephase	100 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0)
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 260 nm	Inj. Vol.	1.0 µL

HILIC カラムとの比較

HILIC カラムは、親水性化合物を分析できる手法として注目されていますが、逆相カラムとは全く異なる分離特性から、分析条件設定が煩雑になる場合があります。また、移動相に高濃度のアセトニトリルを使用するため、移動相よりも溶出力の強い水を多量に注入するとサンプル容量以上にサンプルの拡散がおこりピーク形状が乱れるという難点があります。一方、コスモシール PBr は、C₁₈ カラムと同様の逆相クロマトグラフィーでの分析条件設定が可能であり、移動相よりも溶出力の弱い水を大量に注入してもサンプルが拡散することなくピーク形状は乱れません。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	Uracil (0.1 mg/mL) Uridine (0.2 mg/mL)
Mobilephase	HILIC:Acetonitrile / H₂O = 90 / 10 PBr:H₂O
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 260 nm	Sam. solution	H₂O

分離機構

逆相クロマトグラフィーでは、上側のクロマトグラム（①）のように化合物の疎水性の差(CH₂ 基の数の差）を識別し分離することができます。一方、下側のクロマトグラム（②）のように疎水性に差がない（OCH₂CH₂ 基の数の差）場合、C₁₈ カラムでは保持時間の差がほとんどありませんが、コスモシール PBr ではペンタブロモベンジル基がもつ分散力効果により分離が可能となります。

①疎水性に差がある化合物

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	Benzene Toluene Ethylbenzene n-Propylbenzene n-Butylbenzene
Mobilephase	Methanol / H₂O = 80 / 20
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 254 nm

②疎水性に差がない化合物

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	Benzyl Alcohol Ethylene Glycol Monobenzyl Ether Diethylene Glycol Monobenzyl Ether Triethylene Glycol Monobenzyl Ether Tetraethylene Glycol Monobenzyl Ether
Mobilephase	Methanol/ H₂O = 60 / 40
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 254 nm

■分散力とは？
一般的に中性分子（無極性分子）には電荷の偏りはありません。しかし電子は絶え間なく動いており、瞬間的な状態をみると電荷の偏りが生じて分極していると見なすことができます。この一時的な電気双極子間の引力によって生じる弱い分子間力が"分散力"と呼ばれます。

■分散力が大きい化合物の一例

鎖長の増加など分子量が増加するような化合物
原子半径が大きい置換基を持つ化合物 (例：ハロゲン置換体)
電子の動きが活発な化合物 (例：芳香族化合物) ↓ コスモシール PBr は固定相の 5 個の臭素原子によって大きな分散力を示すため、化合物の分散力の差を認識して高い選択性を示します。

連続分析

水 100% の移動相中で 1,000 回連続分析をしたところ、安定した分析結果が得られました。

Conditions
Column	COSMOSIL PBr　4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	L-Noradrenaline (0.5 mg/mL) L-Adrenaline (0.5 mg/mL) Dopamine (0.5 mg/mL) L-DOPA (0.5 mg/mL)
Mobilephase	20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 2.5)
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	40℃
Detection	UV 280 nm	Inj. Vol.	1.0 µL

PFP カラムとの比較

さまざまなメーカーで販売されているペンタフルオロフェニルカラム（PFP カラム）と、ナカライテスク独自のペンタブロモフェニルカラム（コスモシール PBr）は、どちらも「ベンゼン環にハロゲン原子が 5 つ結合した固定相構造」であるため、分離特性も似通ったものだと捉えがちです。しかし実際は、両者の分離特性は大きく異なり、それぞれ特徴的な分離が実現可能です。

共通点と相違点

PFP	PBr

相互作用の差による保持の違い

PFP（双極子-双極子相互作用）
含フッ素化合物との特異的な相互作用により、
-CF₃、-SF₅ を強く保持する。

PBr（分散相互作用）
-Br、-I を強く保持する。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150 mm	Detection	UV 254 nm
Mobilephase	PFP：Methanol / H₂O = 60 / 40 PBr：Methanol / H₂O = 70 / 30	Sample
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃

詳細はこちらをご覧ください。保持原理と実際の分離例の両面から紹介しています。

製品使用例

コスモシール PBr での分離適用化合物

疎水性の小さな親水性化合物は C₁₈ カラムでは保持が小さいですが、コスモシール PBr では分散力の働きにより保持されます。環式化合物やアミド化合物に対して、コスモシール PBr は C₁₈ カラムよりも大きな保持を与えます。コスモシール PBr でも保持がない化合物にはイオンペア試薬、HILIC カラム、誘導体化などのご使用をお薦めします。

(移動相)

(1) Methanol / 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0) = 10 / 90
(2) 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 2.5)
(3) 20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0)
(4) Methanol / H2O = 10 / 90

分析例 1

カテコールアミン

Conditions
Column	COSMOSIL PBr　4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	L-Noradrenaline (0.5 mg/mL) L-Adrenaline (0.5 mg/mL) Dopamine (0.5 mg/mL) L-DOPA (0.5 mg/mL
Mobilephase	20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 2.5)
Flow rate	1.0 mL/min
Tempera ture	30℃
Detection	UV 280 nm	Inj. Vol.	1.0 µL

ウラシル誘導体

Conditions
Column	COSMOSIL PBr　4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	5,6-Dihydrouracil (0.005 mg/mL) Uracil (0.005 mg/mL) 5-Fluorouracil (0.005 mg/mL) 5-Bromouracil (0.005 mg/mL
Mobilephase	20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 2.5)
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 210 nm	Inj. Vol.	10 µL

オリゴペプチド

Conditions
Column	COSMOSIL PBr　4.6 mm I.D. × 250 mm	Sample	Glycine (25 mg/mL) Glycylglycine (5 mg/mL) Glycylglycylglycine (5 mg/mL) Glycylglycylglycylglycine (5 mg/mL)
Mobile phase	0.1% TFA-H₂O
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm	Inj. Vol.	1.0 µL

分析例 2

グルタチオン

Conditions
Column	COSMOSIL PBr　4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	Glutathione(Reduced Form) (2.5 mg/mL) Glutathione(Oxidized Form) (2.5 mg/mL)
Mobilephase	0.1% TFA-Acetonitrile / H₂O = 5 / 95
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm	Inj. Vol.	1.5 µL

オリゴ糖

Conditions
Column	COSMOSIL PBr　4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	Fructooligosaccharides (50 mg/mL) 1-Kestose Nystose
Mobile phase	A; H₂O B; Acetonitrile B conc. 2 → 10% 10 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	ELSD	Inj. Vol.	0.5 µL

メラミン

Conditions
Column	COSMOSIL PBr　4.6 mm I.D. × 250 mm	Sample	Ammelide (0.1 mg/mL) Cyanuric Acid (0.5 mg/mL) Ammeline (0.1 mg/mL) Melamine (0.1 mg/mL)
Mobilephase	20 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0)
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 225 nm	Inj. Vol.	1.0 µL

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親水性化合物以外への適応

界面活性剤

コスモシール PBr は、C₁₈ カラムや PFP カラムなどと分離特性が違うことから、分離が難しい化合物を分離することができます。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150 mm	Detection	UV 254 nm
Mobilephase	5C₁₈-MS-II, 5PFP:Methanol / H₂O = 80 / 20 5PBr:Methanol	Sample	Triton^® X-100 (50 mg/mL)
Sample	1.0 mL/min	Inj. Vol.	2.0 µL
Tempera ture	30℃	Triton^® はユニオン・カーバイド・コーポレーションの登録商標です。

ハロゲン化合物

ハロゲン化合物に対し、コスモシール PBr は高い選択性を示しています。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150mm	Sample	Fluorobenzene (1.0 mg/mL) α,α,α-Trifluorotoluene〔Benzotrifluoride〕(0.25 mg/mL) Toluene (2.5 mg/mL) Chlorobenzene (5.0 mg/mL) Bromobenzene (5.0 mg/mL) Iodobenzene (2.0 mg/mL)
Mobilephase	Methanol / H₂O = 65 / 35
Flow rate	1.0 mL/min
Tempera ture	30℃
Detection	UV 254 nm	Inj. Vol.	1.0 µL

価格表

分析・分取カラム（粒子径 5 µm）
COSMOSIL PBr

製品名	サイズ内径　×　長さ(mm)	製品番号
COSMOSIL PBr Guard Column / Guard Cartridge	2.0 mm l.D. × 10 mm Cartridge^＊1	18196-94
	4.6 mm l.D. × 10 mm Cartridge^＊2	12444-14
	10 mm l.D. × 20 mm	12396-41
	20 mm l.D. × 20 mm	13256-41
	28 mm l.D. × 50 mm	12653-61
COSMOSIL PBr Packed Column	2.0 mm l.D. × 50 mm	12943-61
	2.0 mm l.D. × 100 mm	13245-81
	2.0 mm l.D. × 150 mm	12392-81
	2.0 mm l.D. × 250 mm	13247-61
	3.0 mm l.D. × 50 mm	12592-61
	3.0 mm l.D. × 100 mm	13249-41
	3.0 mm l.D. × 150 mm	13250-01
	3.0 mm l.D. × 250 mm	13251-91
	4.6 mm l.D. × 50 mm	13252-81
	4.6 mm l.D. × 100 mm	12594-41
	4.6 mm l.D. × 150 mm	12394-61
	4.6 mm l.D. × 250 mm	12395-51
	10 mm l.D. × 50 mm	13253-71
	10 mm l.D. × 100 mm	13254-61
	10 mm l.D. × 150 mm	13255-51
	10 mm l.D. × 250 mm	12397-31
	20 mm l.D. × 50 mm	13257-31
	20 mm l.D. × 100 mm	13258-21
	20 mm l.D. × 150 mm	13259-11
	20 mm l.D. × 250 mm	12398-21
	28 mm l.D. × 100 mm	13260-71
	28 mm l.D. × 150 mm	13261-61
	28 mm l.D. × 250 mm	13262-51

ガードカートリッジカラム（2 個入り）。使用には、＊1 は内径 2.0 mm 用ガードカートリッジホルダー（別売 #11884-71）、＊2 は内径 4.6 mm 用ダイレクトカートリッジホルダー（別売#19989-71）が必要です。

分析カラム（粒子径 3 µm）
COSMOSIL 3PBr

製品名	サイズ内径　×　長さ(mm)	製品番号
COSMOSIL 3PBr Guard Cartridge	2.0 mm l.D. × 10 mm^＊1	19359-34
COSMOSIL 3PBr Guard Cartridge	4.6 mm l.D. × 10 mm^＊2	19360-94
COSMOSIL 3PBr Packed Column	2.0 mm l.D. × 50 mm	19345-91
	2.0 mm l.D. × 75 mm	19346-81
	2.0 mm l.D. × 100 mm	19347-71
	2.0 mm l.D. × 150 mm	19078-01
	2.0 mm l.D. × 250 mm	19348-61
	3.0 mm l.D. × 50 mm	19349-51
	3.0 mm l.D. × 75 mm	19350-11
	3.0 mm l.D. × 100 mm	19351-01
	3.0 mm l.D. × 150 mm	19352-91
	3.0 mm l.D. × 250 mm	19353-81
	4.6 mm l.D. × 50 mm	19354-71
	4.6 mm l.D. × 75 mm	19355-61
	4.6 mm l.D. × 100 mm	19356-51
	4.6 mm l.D. × 150 mm	19357-41
	4.6 mm l.D. × 250 mm	19358-31

※上記以外のカラムサイズをご要望の際はお問い合わせください。

PBr