染色だけの操作 （固定・洗浄・脱色不要） で銀染色に匹敵する高感度
Lumitein™ Protein Gel Stain
Biotium社はさまざまな蛍光色素を開発しているメーカーです。高感度で簡略化されたプロトコールによりシンプルかつスピーディーにタンパク質を検出することができます。
特長
- 固定・洗浄・脱色不要
- 高感度検出
- トランスイルミネーター （UV＋EtBrフィルター） で観察可能
- 染色後のMSやシークエンス解析が可能
- 幅広い波長で励起可能
- 幅広い濃度において定量性あり
他の染色法との比較
Lumitein™は、高感度かつ簡便なタンパク質の蛍光染色試薬です。他の蛍光染色試薬や一般的なCBB染色法、銀染色法よりも簡単な操作で高感度に検出できます。
| 蛍光染色試薬 | 一般的な銀染色法 | 一般的なCBB染色法 | |||
|---|---|---|---|---|---|
| Lumitein™ | A社製品 | B社製品 | |||
| 固定・洗浄・脱色の操作 | 不要 | 不要 | 必要 | 必要 | 必要 |
| 総操作時間 | 基本法：約90分 迅速法：約30分 |
約90分 | オーバーナイト以上 | 約2時間 | 数時間 |
| 感度 | 1ng以下 | ngオーダー | 0.25-1ng | 数ng～1ng以下 | 数十ng |
*脱色・洗浄操作は不要ですがお好みで行うことができます。操作は脱色5分（30%メタノール、15%酢酸）、洗浄5分（水）です。
*Lumitein™の染色時間は、迅速法30分でも染色像は確認できますが、最高感度の検出は基本法の90分を推奨しています。
使用例
■ Lumitein™染色後のUV検出
分子量マーカーのSDS-PAGE （12.5%）
| Protein | Mr | Amount (ng/lane) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Dilution Factor | |||||||
| 40 | 80 | 160 | 320 | 640 | 1280 | ||
| Phosphorylase b | 97,000 | 41.9 | 20.9 | 10.5 | 5.2 | 2.6 | 1.3 |
| Albumin | 66,000 | 51.9 | 25.9 | 13.0 | 6.5 | 3.2 | 1.6 |
| Ovalbumin | 45,000 | 91.9 | 45.9 | 23.0 | 11.5 | 5.7 | 2.9 |
| Carbonic anhydrase | 30,000 | 51.9 | 25.9 | 13.0 | 6.5 | 3.2 | 1.6 |
| Trypsin inhibitor | 20,100 | 50.0 | 25.0 | 12.5 | 6.3 | 3.1 | 1.6 |
| α-Lactalbumin | 14,400 | 72.5 | 36.3 | 18.1 | 9.1 | 4.5 | 2.3 |
サンプル：Low Molecular Weight Calibration Kit for SDS Electrophoresis（GE Healthcare UK Ltd）
染色：電気泳動後、別容器内の1×溶液30mlに浸し、90分間振盪
脱色：なし
洗浄：蒸留水を加えて軽くリンス
撮影：ImageQuant™ LAS4000 （GE Healthcare UK Ltd） 感度-スタンダード 光源- 312nm UV透過 フィルター- 605 EtBr 露光時間- 1/30 sec
データご提供：
神戸大学 自然科学系先端融合研究環 重点研究部（近藤昭彦研究室） 仲島 菜々実 研究員 / 岡崎 文美 特命助教
■ 高感度検出
タンパク質マーカーを2倍希釈系列で泳動後、Lumitein™ （脱色・洗浄ステップ有り） で染色したところ、0.2ng以下のタンパク質も検出できました。データはGE Healthcare UK Ltd Typhoon™ Trioを用いて取得しました （ex.532nm、610BP30フィルター）。本製品は、脱色・洗浄操作は不要ですが、お好みで行うことができます。操作は脱色5分 （30%メタノール、15%酢酸）、洗浄5分 （水） です。
■ 2次元電気泳動後のゲルの染色
ヒト肝臓由来のタンパク質抽出物をLumitein™により染色しました。3つの円内のスポットをMS解析した結果、本試薬はMSに適合することが確認できました。
■ CBB染色法との比較
タンパク質マーカーを2倍希釈系列で泳動後、Lumitein™ （データ左） 、CBB（データ右） で染色しました。Lumitein™で染色したデータは、EtBrフィルター （UVP社） を装着したUVボックスにより検出しました。CBB染色したデータは、白色光コンバータ （UVP社） を用いて検出しました。その結果、CBB染色法よりも簡単な操作で、高感度に検出できることが示されています。
スペクトル
■ Lumitein™の励起・蛍光スペクトル
Lumitein™のUV最大励起波長は280nm付近で、可視励起波長は450nmを中心に広範囲に及んでいます。蛍光波長は610nm付近で明るい赤色の蛍光を発します。
■ Lumitein™に対応する励起光源・フィルターと蛍光フィルター
Lumitein™で染色したゲルは、300nm UV トランスイルミネーター、470nm blue LED トランスイルミネーター、レーザースキャナー(450nm、473nm、488nm、532nm)等種々の装置で観察できます。最大感度を得るためには、蛍光フィルターに490nmのロングパスフィルターをご使用ください。詳しくは下の表をご参照ください。
| 適切な励起光源・フィルター | 300nm UV, 365nm UV, 450±15 (filter), 470nm blue LED, 473nm laser, 480nm excitation interference filter (epi-illumination), 485±4.5nm (monochromator), 488nm laser, 532nm laser. |
|---|---|
| 適切な蛍光フィルター | 490nm longpass (best), 515nm longpass, 520nm longpass, 580nm longpass, 590nm longpass, 595±4.5nm (monochromator, Molecular Devices), ethidium bromide filter, 600nm bandpass, 600±20nm, 600±35nm, 610nm longpass, 610±35nm, 618nm bandpass, 620nm bandpass, 625±15nm, 625±T15nm, Texas Red filter (～630nm bandpass), 640±35nm |
価格表
| 製品名 | メーカー製品番号 | 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|
| Lumitein™ Protein Gel Stain, 1X | 21001 | 06476-94 | 200 ml |  |
| 21001-1 | 06476-81 | 1 L | |
|
| 21001-2 | 06476-36 | 5×1 L | |
|
| Lumitein™ Protein Gel Stain, 100X | 21002 | 24273-84 | 2 ml | |
| 21002-1 | 24273-26 | 10 ml | |
|
| 21002-2 | 50 ml | |
貯法：冷蔵または室温(遮光)で1年間保存可能
※記載の内容は、'15年11月現在の情報に基づいております。
