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細胞培養用特性試薬 マイトマイシンC 溶液（1mg/ml）

マイトマイシンCは、細胞内で還元されDNAの核酸塩基分子に結合し、二本鎖DNAへの架橋形成を介して、DNAの開裂を阻止することによりDNAの複製を阻害します。青紫色の抗生物質で、抗腫瘍活性、およびグラム陽性菌・陰性菌に対する強力な抗菌作用、変異誘発作用を有しています。

 

 

特長

• 培養細胞にそのまま使用可能　－　無菌調製品
• 冷凍庫から出してすぐ使用可能　－　冷凍庫（-20℃）で固化しない
• 成分の析出なし　－　溶液組成安定性抜群

 

マイトマイシンCは溶解後、不安定であることが知られており、水もしくはPBSに溶解した場合、冷凍保存すると成分が析出してしまい、また、力価が90%以上保持される期間は冷蔵で約3日間、室温で約1日間です。しかしながら、本品の溶液組成における安定性は非常に高く、有効期限は2年（冷凍・遮光保存）です。

 

図1．マイトマイシンC溶液の安定性

本品（#20898）、PBS溶液、水溶液（各1mg/ml）を冷凍もしくは冷蔵で保存し、2ヵ月後および10ヶ月後に力価を測定し、各溶液における残存力価を比較しました。PBS溶液および水溶液では力価の低下が確認されましたが、本品ではほとんど力価は低下していませんでした。本品は冷凍保存で2年間安定であることを確認しています。

 

 

製品内容

マイトマイシンCを1mg/mlの濃度に調製した10v/v%エタノール・90v/v%エチレングリコール溶液

 

 

用途

マイトマイシンCの細胞増殖停止作用を利用して、次のような用途に使用できます。

• フィーダー細胞の作製
• 毒性試験などにおける、細胞数測定試薬（MTTなど）使用時の細胞数固定

 

 

使用例

■フィーダー細胞の作製（ES細胞培養）

1. マウス胎児繊維芽細胞（STO細胞など）をコンフルエントになるまで培養します。
2. 本品を最終濃度10μg/mlとなるように添加・混合します。
3. CO₂インキュベーター内で37℃、2～3時間インキュベートします。
4. 培地を吸引除去し、PBSで2回洗浄します。
5. トリプシン-EDTA溶液で細胞を剥離し、回収します。
6. 細胞数を計測し、あらかじめゼラチン処理した培養容器に適切な細胞数を播種します。
7. CO₂インキュベーター内で培養します。
8. 翌日、細胞が生着し、フィーダーとして使用できます。

 

STO細胞にマイトマイシンCを10μg/mlの濃度で作用させ、その作用時間の関係を確認しました。常法に従い2時間処理した場合、細胞の増殖が停止し、培養日数の経過とともに少しずつ細胞数が減少していました。また、6時間処理した場合は細胞の死滅が早い現象が認められました。本品はPBS溶液（用時調製）と同等の性能を有していることが認められました。 

 

図2．フィーダー細胞作製時のマイトマイシンC処理時間の影響

マイトマイシンC溶液を最終濃度が10μg/mlとなるように添加し、1時間・2時間・6時間作用させ、処理後1日～10日経過した細胞の細胞数をMTT法により測定しました。

＜検討条件＞
培地：MEM　w/NEAA（#21443-15）　with 10% 牛胎児血清
総液量：0.1ml/well（96well plate 使用）
細胞数測定：MTT 細胞数測定キット（#23506-80）

 

 

アプリケーション

■細胞に対する影響

マイトマイシンCをSTO細胞に作用させ、濃度および作用時間と細胞数の関係を確認しました。本品はPBS溶液（用時調製）と同等の性能が認められました。

 

図3．マイトマイシンC溶液のSTO細胞に対する影響

マイトマイシンC溶液を最終濃度が0～100μg/mlとなるように添加し、2時間・6時間・24時間作用させ、5日間培養した後にMTT法により細胞数を測定しました。

＜検討条件＞
培地：MEM　w/NEAA（#21443-15）　with 10% 牛胎児血清
総液量：0.1ml/well（96well plate 使用）
細胞数測定：MTT 細胞数測定キット（#23506-80）

 

■製品保存期間の細胞に対する影響 

製造ロットの異なる2種類の製品を用いて、細胞に対する保存期間の影響を確認しました。本試験時において、Lot.①は調製後17ヶ月経過、Lot.②は調製後4ヶ月経過したものです。両者の結果より有効期限内の製品であれば、用時調製品と同等の性能を有していることが認められました。

 

図4．マイトマイシンC溶液の保存期間の影響

マイトマイシンC溶液を10μg/mlの濃度で2時間作用させ、処理後2日・6日・9日経過した細胞の細胞数をMTT法により測定しました。力価は、本試験に使用時の残存力価（%）を示しています。

＜検討条件＞
培地：MEM　w/NEAA（#21443-15）　with 10% 牛胎児血清
総液量：0.1ml/well（96well plate 使用）
細胞数測定：MTT 細胞数測定キット（#23506-80）

 

 

価格表 

 

※記載の内容は、'16年2月現在の情報に基づいております。