HILIC

トリアゾール結合型
逆相で保持のない親水性化合物の分離に最適
親水性相互作用＋陰イオン交換能

セミナー動画

固定相構造と物性

充填剤名称	HILIC
シリカゲル	全多孔性球状高純度シリカゲル
平均粒子径（µm）	5
平均細孔径（約 Å）	120
比表面積（約 m²/g）	300
固定相構造
化学結合基	トリアゾール
相互作用	親水性・陰イオン交換
対象サンプル	親水性化合物・酸性化合物
特長	・C₁₈ で保持のない化合物に有効

逆相（C₁₈）カラムとの比較

親水性相互作用クロマトグラフィー（Hydrophilic Interaction Chromatography = HILIC）は順相クロマトグラフィーの一種です。
逆相クロマトグラフィーとは反対の分離作用であり、カラムに注入されたサンプルは、親水性の低い（疎水性の高い）化合物から溶出します。
C₁₈ カラムで保持のない親水性化合物を分析する場合、イオンペア試薬を使用することが多いですが、コスモシール HILIC ではイオンペア試薬を使用せずに分離が可能になります。イオンペア試薬の問題点である、カラムの平衡に時間がかかる、カラムの劣化が速い、移動相の調製が手間であるなどが解消できます。
また、コスモシール HILIC は、固定相のトリアゾールの効果により陰イオン交換能が働くため、酸性化合物の保持が大きくなる特性を持っています。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 250 mm	Sample	Glycine (5.0 mg/mL) Glycylglycine (0.125 mg/mL)
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 210 nm	Inj. Vol.	2.0 µL

他社とは異なる分離特性

コスモシール HILIC は固定相にトリアゾールを有します。そのため酸性化合物に対して保持が大きくなり、他社カラムと異なる分離特性を示します。クロマトグラムにおいて Peak 3、4 は、陰イオン交換能により他社カラムと比べて保持時間が大きくなっています。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 250 mm	Detection	UV 225 nm
Mobile phase	Acetonitrile / 10 mmol/L Ammonium Acetate = （COSMOSIL) = 70 / 30 （他社）= 80 / 20	Sample	Melamine (0.10 mg/mL) Ammeline (0.075 mg/mL) Cyanuric Acid (0.75 mg/mL) Ammelide (0.05 mg/mL)
Flow rate	1.0 mL/min	Sample
Temperature	30℃	Inj. Vol.	1.0 µL

相互作用と分離例

親水性相互作用と陰イオン交換能の効果

コスモシール HILIC は固定相のトリアゾールの効果による親水性相互作用（水素結合による）と陰イオン交換能の 2 つの相互作用によって化合物を分離します。2 つの相互作用は移動相によって使い分けることが出来ます。

親水性相互作用による分離

Conditions
Column	COSMOSIL HILIC 4.6 mm I.D. × 250 mm	Sample	Isoascorbic Acid 〔Erythorbic Acid〕 (0.5 mg/mL) Ascorbic Acid (0.5 mg/mL)
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 245 nm	Inj. Vol.	2.0 µL

陰イオン交換能による分離

Conditions
Column	COSMOSIL HILIC 4.6 mm I.D. × 250 mm	Detection	UV 210 nm
Mobile phase	Acetonitrile / 10 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7.0) = 50 / 50	Sample	Oxamic Acid (0.4 mg/mL) Oxalic Acid (2.0 mg/mL)
Flow rate	1.0 mL/min	Inj. Vol.	2.0 µL
Temperature	30℃	Inj. Vol.	2.0 µL

分析例

メラミン関連物質

Conditions
Column	COSMOSIL HILIC 4.6 mm I.D. × 250 mm
Mobile phase	Acetonitrile / 10 mmol/L Ammonium Acetate = 70 / 30
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 225 nm
Sample	Melamine (0.1 µg) Ammeline (0.075 µg) Cyanuric Acid (0.75 µg) Ammelide (0.05 µg)

BCAA（分岐鎖アミノ酸）

Conditions
Column	COSMOSIL HILIC 4.6 mm I.D. × 250 mm
Mobile phase	Acetonitrile/ 10 mmol/L Ammonium Acetate = 85 / 15
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	ELSD
Sample	L-Leucine (3.0 µg) L-Isoleucine (3.0 µg) L-Valine (3.0 µg)

研究者の使用例など

C₁₈ カラムとの併用利用

C₁₈ カラムと組み合わせてお使いいただくことにより分離の幅が広がります。

C₁₈ カラムとの併用利用

Conditions

Column size

4.6 mm I.D. × 250 mm

Mobile phase

5C₁₈-AR-II	A:Acetonitrile / 0.1% TFA = 10 / 90
	B:Acetonitrile / 0.1% TFA = 30 / 70
	B 0 → 100% 20 min Linear gradient
HILIC	Acetonitrile / 10 mmol/L Phosphate Buffer(pH 7) = 70 / 30

Flow rate

1.0 mL/min

Temperature

30℃

Detection

UV 220 nm

Sample

Angiotensin II, 〔Sar¹,Thr⁸〕 (0.5 µg)
Angiotensin II, 〔Sar¹,Ala⁸〕 (0.5 µg)
Angiotensin II, Des-Asp¹-〔Ile⁸〕 (0.5 µg)
Angiotensin II, 〔Sar¹,Ile⁸〕 (0.5 µg)
Angiotensin II, 〔Asn¹,Val⁵〕 (0.5 µg)
Angiotensin II, 〔Val⁵〕 (0.5 µg)
Angiotensin II (Human) (0.5 µg)

分析条件の設定

親水性相互作用クロマトグラフィーは比較的新しい分離機構であり、まだ使用例が多くありません。そこで弊社ではコスモシール HILlC カラムを身近に使っていただくために、分析例をご用意しました。分析したい化合物はもちろんのこと、類似化合物の分離条件の参考としてご利用ください。
新しい分析例は随時こちらで公開しております。

COSMOSIL Application Data HILIC 2012 の一例

HPLC COSMOSIL
Application Data
HILIC 2012
(PDF ファイル 17 MB)

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価格表

分析・分取カラム（粒子径 5 µm）
COSMOSIL　HILIC

製品名	サイズ	製品番号
COSMOSIL　HILIC　Guard Column / Guard Cartridge	2.0 mm I.D. × 10 mm	07569-41
	4.6 mm l.D. × 10 mm Cartridge^＊1	19184-14
	10 mm I.D. × 20 mm	07058-31
	20 mm I.D. × 20 mm	07854-91
	20 mm I.D. × 50 mm	07873-41
	28 mm I.D. × 50 mm	07874-31
COSMOSIL　HILIC　Packed　Column	1.0 mm I.D. × 150 mm	07869-11
	1.0 mm I.D. × 250 mm	07870-71
	2.0 mm I.D. × 30 mm	08568-21
	2.0 mm I.D. × 50 mm	07052-91
	2.0 mm I.D. × 100 mm	08569-11
	2.0 mm I.D. × 150 mm	07054-71
	2.0 mm I.D. × 250 mm	07489-91
	3.0 mm I.D. × 150 mm	07871-61
	3.0 mm I.D. × 250 mm	07872-51
	4.6 mm I.D. × 150 mm^＊2	07056-51
	4.6 mm I.D. × 150 mm 3 ロットセット ^{＊2, 3}	09385-23
	4.6 mm I.D. × 250 mm^＊2	07057-41
	10 mm I.D. × 150 mm	05564-51
	10 mm I.D. × 250 mm	07059-21
	20 mm I.D. × 250 mm	07060-81
	28 mm I.D. × 250 mm	07875-21

^＊1 Guard Cartridge は 2 個入りです。別途にカートリッジホルダーが必要です。

^＊2 バリデーション対象カラム

^＊3 3 ロット提供　弊社では、コスモシールの高い再現性を証明するために充填剤ロットの異なる 3 種類のカラムの提供を行っています。詳しくは最寄りの弊社営業所・販売取扱店、またはお問い合わせフォーム（https://www.nacalai.co.jp/ss/Contact/）からお問い合わせください。

上記以外のカラムサイズをご要望の際はお問合せください。

※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。