Protein-R

ワイドポアタイプの C₁₈ カラム
高い回収率
酸性移動相に対する高い耐酸性

物性

充填剤名称	Protein-R
シリカゲル	全多孔性球状高純度シリカゲル
平均粒子径（µm）	5
平均細孔径（約 Å）	300
比表面積（約 m²/g）	150
化学結合基	オクタデシル基
結合形式	ポリメリック
相互作用	疎水性相互作用
エンドキャッピング	あり
使用可能 pH 範囲	1.5 〜 7.5^*

^*シリカベースのカラムの使用推奨 pH は 2 〜 7.5 の範囲になります。推奨 pH 外での使用は可能ですが劣化を早める恐れがあります。

分離性能の比較

コスモシール Protein-R は従来型の C₁₈ ワイドポアカラムよりもタンパク質をシャープに分離します。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	Ribonuclease A (1.0 µg) Cytochrome C (1.0 µg) Lysozyme (1.0 µg) Albumin, Bovine [BSA] (1.0 µg) Myoglobin (1.0 µg) Albumin, Egg [Ovalbumin] (1.0 µg)
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 20 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm

回収率の比較

下図は各カラムのタンパク質の回収率を示しています。コスモシール Protein-R は、C₄-300 以上の回収率、また、従来の C₁₈-300 よりも非常に高い回収率を示しました。

酸性移動相に対する耐久性の比較

下図は各カラムの酸性移動相に対する耐久性を示しています。コスモシール Protein-R は C₄-300 よりも非常に高い耐酸性を示しました。

0.1% トリフルオロ酢酸水溶液を封入、60℃ での分解試験
保持係数（k）はメタノール / 水 = 50 / 50 移動相でのナフタレンの値

他社比較

コスモシール Protein-R は従来型の他社ワイドポアカラムよりもタンパク質をシャープに分離します。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150 mm	Sample	1.0 µg each Ribonuclease A (MW:13,700) Cytochrome C (MW:12,400) Lysozyme (MW:14,300) BSA (MW:66,000) Myoglobin (MW:17,000) Ovalbumin (MW:45,000)
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 20 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm

分析例

Tau タンパク質

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 20 mm I.D. × 250 mm
Mobile phase	A; 0.1% TFA-H₂O B; 0.1% TFA-Acetonitrile B conc. 20%(0-13 min), 20 → 50%(13-43 min)
Flow rate	9.0 mL/min
Temperature	Room temperature
Detection	UV 215 nm
Sample	Recombinant human tau (2N4R)
Data courtesy of Akihiko Takashima, Ph.D. Laboratory for Alzheimer's Disease, RIKEN Brain Science Institute

糖タンパク質

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 20 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm
Sample	Concanavalin A (1.0 µg)

豆乳タンパク質

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-H₂O B; 0.05% TFA-Acetonitrile B conc. 20 → 80% 20 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm
Sample	Soybean milk
Sample Preparation	Ultracentrifuged at 90,000 g for 1 hr. Clear supernatant solution was injected.
Inj. Vol.	1.0 µL

牛乳タンパク質

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-H₂O B; 0.05% TFA-Acetonitrile B conc. 20 → 80% 20 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm
Sample	Milk
Sample Preparation	Ultracentrifuged at 90,000 g for 1 hr. Clear supernatant solution was injected.
Inj. Vol.	1.0 µL

細菌由来タンパク質

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm　0.256 AUFS
Sample	Choline Oxidase (6.0 µg) α-Amylase (3.0 µg) Glucose Oxidase (6.0 µg) Thermolysin (9.0 µg)

ヒト由来タンパク質

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm　0.256 AUFS
Sample	Transferrin (1.5 µg) Albumin, Human (2.0 µg) Carbonic Anhydrase (1.0 µg)

ウシ脾臓由来タンパク質

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm　0.256 AUFS
Sample	Ribonuclease A (1.0 µg) α-Chymotrypsinogen A (1.0 µg) Deoxyribonuclease I (3.0 µg)

粗精製ミオシン

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm　0.256 AUFS
Sample	Myosin (20 µg)

粗精製ジアフォラーゼ

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm　0.256 AUFS
Sample	Diaphorase (6.0 µg)

ピルベートキナーゼ

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm　0.256 AUFS
Sample	Pyruvate Kinase (4.0 µg)

ペプチド

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 0.05% TFA-H₂O B; 0.05% TFA-Acetonitrile B conc. 10 → 40% 20 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 220 nm
Sample	Oxytocin (0.8 µg) Angiotensin II(Human) (0.8 µg) Angiotensin I(Human) (0.8 µg) Substance P (0.8 µg)

オリゴヌクレオチド

Conditions
Column	COSMOSIL Protein-R　 4.6 mm I.D. × 150 mm
Mobile phase	A; 100 mmol/L Ammonium Acetate B; Acetonitrile B conc. 9 → 11% 15 min Linear gradient
Flow rate	1.0 mL/min
Temperature	30℃
Detection	UV 260 nm
Sample	pd(T)_12-18

食品添加物に指定されたナイシン（Nisin）の分析

ナイシン（Nisin）は、代表的なバクテリオシンのひとつであり、Lactococcus lactis subsp. lactis が産出する 34 個のアミノ酸から成るペプチドです。
ナイシン（Nisin）は、ランチオニンなどの特殊な構造のアミノ酸を含んでおり、ランチビオティクス系のバクテリオシンに分類されています。
ナイシン（Nisin）は、バチルス属やクロストリジウム属の細菌芽胞に対して効果的に作用し、現在 50 カ国以上で保存料として使用されています。

日本でも 2009 年 3 月 2 日にナイシンが食品添加物として指定されました。
財団法人日本食品化学研究振興財団では、「ナイシン試験法」（PDF 381 KB）を公開しています。
その中で、測定法の測定条件のカラムとして、オクタデシルシリル化シリカゲル（粒子径 5 μm、細孔径 300 Å、内径 2.0 〜 4.6 mm、長さ 150 〜 250 mm）が指定されています。
C₁₈ 系カラムは、各社多種多様なものがありますが、コスモシール Protein-R カラムが良好なピークを示したと紹介されています。

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性能

一般的な C₄（300 Å）と C₁₈（300 Å）の weak point と strong point

ペプチドの分離

分子量の小さなペプチドには細孔径 120 Å のコスモシール 5C₁₈-AR-II が高い分離能を示しますが、分子量の大きいペプチドには Protein-R が良い分離を示します。

Conditions
Column size	4.6 mm I.D. × 150 mm	Temperature	30℃
Mobile phase	A: 0.05% TFA-H₂O B: 0.05% TFA-Acetonitrile B conc. 0 → 35% 60 min Linear gradient	Detection	UV 220 nm
Flow rate	1.0 mL/min	Sample	Poly-L-Glutamic Acid Sodium Salt （MW 1,500 ～ 5,000)(200 µg）

分取精製へ

価格表

分析・分取カラム（粒子径 5 µm）
COSMOSIL Protein-R

製品名	サイズ	製品番号
COSMOSIL Protein-R Guard Column	4.6 mm I.D. × 10 mm	06518-31
	10 mm I.D. × 20 mm	06528-01
	20 mm I.D. × 20 mm	08692-81
COSMOSIL Protein-R Packed Column	2.0 mm I.D. × 150 mm	06514-71
	4.6 mm I.D. × 50 mm	06525-31
	4.6 mm I.D. × 150 mm	06526-21
	4.6 mm I.D. × 250 mm	06527-11
	10 mm I.D. × 150 mm	06529-91
	10 mm I.D. × 250 mm	06530-51
	20 mm I.D. × 150 mm	06531-41
	20 mm I.D. × 250 mm	06532-31