C18-PREP
逆相液体クロマトグラフィーは優れた分離特性、理論段数、再現性、および使いやすさなどにより広く用いられていますが、分取精製のための高性能大型カラムは高価であり、より安価な手法が求められています。
分析目的では 3 µm や 5 µm という微細粒子径充填剤が一般的ですが、大量分取の場合は必ずしもそのような必要はなく、50 µm から 140 µm の充填剤で十分な場合も多くあります。
弊社では分取専用充填剤として最も効率的な粒子径を選び、安価な汎用 C18 型充填剤を提供しています。
分取精製の大幅なコストダウンにつながるものと確信しています。
また、シラノールはエンドキャップされていますので、塩基性物質などの分取にも分析からのスケールアップとして使用できます。
粒子径と流速
図 1 メタノール-水系移動相の組成と流速の関係
カラムサイズ: 内径 10 mm ベット高 180 mm、
自然重力送液
逆相クロマトグラフィーでは一般にメタノール、水などの粘度の高い溶媒を用いるため、粘度の低いヘキサン、酢酸エチルなどを用いる順相クロマトグラフィーよりも流速は遅くなります。図 1 にコスモシール C18-PREP を用いたオープンカラムクロマトグラフィーでの溶媒組成と流速の関係を示しました。
粒子径と理論段数
図 2 中圧カラムクロマトグラフィーにおける粒子径、
流速と理論段数の関係
カラムサイズ:20 mm I.D. × 300 mm
粒子径が小さい場合、流速がおそいほど理論段数は高くなります。中圧カラムクロマトグラフィーでも分析の場合よりも線速度をおそくして流すと分離が向上します。
分離例
疎水性の高い物質はオープンカラムクロマトグラフィーでの分離も可能ですが、親水性の高い化合物はクローズドカラムでの中圧カラムクロマトグラフィーが最適です。
ビタミン E
Conditions | |||
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Column | COSMOSIL 50C18-PREP 20 mm I.D. × 300 mm (Closed column) |
Detection | UV 280 nm |
Mobile phase | Methanol | Sample |
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Flow rate | 9.9 mL/min | ||
Tempera ture | 30℃ | Inj. Vol. | 185 µL |
生薬
Conditions | |||
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Column | COSMOSIL 50C18-PREP 20 mm I.D. × 300 mm (Closed column) |
Detection | UV 254 nm |
Mobile phase | Trifluoroacetic Acid / Methanol / H2O = 0.5 / 70 / 30 | Sample |
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Flow rate | 9.9 mL/min | ||
Tempera ture | 30℃ | Inj. Vol. | 300 µL |
塩基性化合物
Conditions | |||
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Column | COSMOSIL 50C18-PREP 20 mm I.D. × 300 mm (Closed column) |
Detection | UV 254 nm |
Mobile phase | Methanol / 20mmol/L Ammonium Acetate = 70 / 30 | Sample |
|
Flow rate | 9.9 mL/min | ||
Tempera ture | 30℃ | Inj. Vol. | 30 µL |
極性化合物
Conditions | |||
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Column | COSMOSIL 50C18-PREP 20 mm I.D. × 300 mm (Closed column) |
Detection | UV 254 nm |
Mobile phase | Methanol / H2O = 30 / 70 | Sample |
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Flow rate | 9.9 mL/min | ||
Tempera ture | 30℃ | Inj. Vol. | 320 µL |
抗真菌剤
Conditions | |||
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Column | COSMOSIL 50C18-PREP 20 mm I.D. × 300 mm (Closed column) |
Detection | UV 230 nm |
Mobile phase | Methanol / 20mmol/L Ammonium Acetate = 90 / 10 | Sample |
|
Flow rate | 9.9 mL/min | ||
Tempera ture | 30℃ | Inj. Vol. | 50 µL |
クマリン
Conditions | |||
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Column | COSMOSIL 50C18-PREP 20 mm I.D. × 300 mm (Closed column) |
Detection | UV 254 nm |
Mobile phase | Methanol / H2O = 40 / 60 | Sample |
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Flow rate | 9.9 mL/min | ||
Tempera ture | 30℃ | Inj. Vol. | 25 µL |
カラムサイズと充填剤量
カラムサイズと必要なおよその C18-PREP 充填剤量
カラム内径(mm I.D.) | ベッド高(mm) | 体積(mL) | 充填剤量(g) |
---|---|---|---|
8 | 300 | 15 | 9 |
500 | 25 | 15 | |
10 | 300 | 25 | 15 |
500 | 40 | 25 | |
20 | 300 | 95 | 55 |
500 | 160 | 95 | |
30 | 300 | 210 | 125 |
500 | 350 | 220 | |
50 | 300 | 560 | 350 |
500 | 980 | 600 |
充填方法
カラムクロマト用充填剤のカラム充填方法については、COSMOSIL テクニカルノート ⑫ カラムクロマト用充填剤のカラム充填方法をご参照ください。