( )*の中の数値は規格値ではなく、参考としての物性値です。

移動相とする緩衝液中にイオンペア試薬を溶解して使用します。
イオンペア試薬を使用して分析を行う際は、分析前の平衡時間や分析終了後のカラム洗浄時間を長めにしてください。
これはイオンペア試薬自体が充填剤に保持されるので平衡や洗浄に時間がかかるためです。
炭素鎖長が C₁₀ 以下のイオンペア試薬を使用する場合、目安としては分析前の平衡は 20 分、分析後の洗浄は 5％ アセトニトリルなどで 30 分程度必要です。
（C₁₀ 以上のイオンペア試薬を使用する場合、カラム内のイオンペア試薬の洗浄に 1 時間以上かかることもありますので、専用のカラムを用意していただくことをお薦めします）

以下の方法は弊社、推奨の設定方法です。

※HILIC カラムについてはこちら

イオンペア試薬の条件設定

Dabsyl Chloride(4-Dimethylaminoazobenzene-4'-sulfonyl Chloride)

C₁₄H₁₄ClN₃O₂S
M.W.=323.80

本製品は暗赤色結晶、m.p.185 ～ 188℃ (dec.)、水にはほとんど溶けない。アセトンにわずかに溶ける。
アミノ基のラベル化剤で、アミン、アミノ酸、ペプチドなどと結合し、可視部に強い吸収（最大吸収波長 430 nm）をもつ Dabsyl 誘導体を生成する。
DNBC（3,5-Dinitrobenzoyl Chloride）に比べ約 100 倍、蛍光ラベル化剤であるダンシルクロリドと同程度の感度を有するラベル化剤です。

例）

1. アミノ酸のラベル化
   アミノ酸 60 nmol を 0.3 mL の炭酸ナトリウム－炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH 8.9、0.1 mol/L）に溶かし、本製品の 10 µmol/mL アセトン溶液 0.3 mL を加え、 攪拌しながら 70℃で 6 分反応させる。
2. ペプチドのラベル化
   サンプル 300 nmol を 0.5 mL の炭酸ナトリウム－炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH 8.9）に溶かし、本製品の 10 µmol/mL アセトン溶液 0.5 mL を加え、70℃で 6 分反応させる。反応液を減圧乾固し、5.7N-塩酸 1.5 mL を加え、105℃で 3 時間加水分解し、HPLC のサンプルにする。

Ref.

1. J.K.Lin,J.Y.Chang,Anal.Chem.47,1634(1975).
2. J.Y.Chang,E.H.Creaser,J.Chromatogr.116,215(1976).
3. J.K.Lin,C.C.Lai,Anal.Chem.52,630(1980).

3,5-Dinitrobenzoyl Chloride（DNBC）

本製品は淡黄色結晶、m.p.67 ～ 69℃、アルコール、エーテル、ベンゼンに溶ける。
水酸基（R-OH）、アミノ基（R-NH₂、R-NH-R'）とも反応し、水酸基では 3,5-ジニトロベンゾイルエステル、アミノ基では 3,5-ジニトロンベンズアミドを生成する。

C₇H₃ClN₂O₅
M.W.=230.56

例）

サンプル数 mg をテトラヒドロフラン 5 mL に溶かし、本製品 40 mg、ピリジン 2 ～ 3 滴加えて密封し、60℃で 1 時間反応させて室温に冷却後、反応液を HPLC のサンプルにする。
塩酸を除くためにピリジン、またはトリエチルアミンを使用した場合、分析する前処理としてクリーンアップする必要がある。
クリーンアップ法；溶媒を除去してエーテル抽出を行い、エーテル層を希塩酸と水で洗浄する。

Ref.

1. T.H.Jupile,Am.Lab.8,85(1976).
2. M.A.Carey,H.E.Persinger,J.Chromatogr.Sci. 10,573(1972).
3. 鈴木義仁, 土屋典子, 分析化学 30,240(1981).
4. L.J.Elrod,L.B.White,S.G.Spanton,D.G.Stroz,P.J.Cugier,L.A.Luka,Anal.Chem. 56,1786(1984).

NBD Chloride(7-Chloro-4-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole)

本製品は淡黄色結晶、m.p.95 ～ 98℃、アルコールに可溶、ダンシルクロリドより水に溶ける。
アミノ基（R-NH₂、R-NH-R'）と反応して強い蛍光を発する。また、加水分解によって得られたアミノ基（カルバミド系農薬）やメルカプト基（R-SH）ともよく反応する。

C₆H₂ClN₃O₃
M.W.=199.55

例）

1 ～ 20 µg のアミンを含むメタノール溶液 25～500 µL に 4 ～ 8 倍モル過剰の本製品 0.05％ メタノール溶液を加え、0.1 M-炭酸水素ナトリウム 50 ～ 100 µLを加えて攪拌し、55℃ で 1 ～ 5 時間反応させ、室温と冷却後、反応液を HPLC のサンプルにする。

Ref.

1. J.F.Lawrence,R.W.Frei,Anal.Chem.,44,2046(1972)
2. H.F.Van,A.Heyndrickx,Anal.Chem.,46,286(1974)
3. H.J.Klimisch,L.Stadlen,J.Chromatogr.,90,141(1974)
4. J.H.Wolfram,J.Chromatogr.,132,37(1977)
5. Y.Nishikawa,K.Kuwata,Anal.Chem.,57,1864(1985)

o-Phthalaldehyde,recryst（OPA）

本製品は黄色結晶、m.p.56 ～ 57℃。水、多くの有機溶媒に可溶、エーテルに難溶。1 級アミン、チオール化合物と反応して蛍光を発する。

分析条件
カラム	COSMOSIL 5C18-MS-II 4.6 mmI.D. × 150 mm
移動相	メタノール：20 mmol/L Phosphoric Acid＝ 70：30
流　速	1.0 mL/min
温　度	30℃
検　出	Ex.340 nm Em.450 nm RANGE 128
サンプル	Glycine L-Alanine L-Valine L-Leucine

C₆H₂ClN₃O₃
M.W.=199.55

例）

サンプル 5 mL に 10％塩酸 0.05 mL 加えて酸性とした後、本製品の 4 mg/mL メタノール溶液 2 mL を加えて攪拌し、2-メルカプトエタノール 0.05 mL と pH 9 炭酸緩衝液 3 mL を加え、1 分室温に放置してからフィルターでろ過し、HPLC のサンプルにする。