10 ng/100 µL に調製した λ/Hind Ⅲ溶液を、0.3 mol/L 酢酸ナトリウム存在下にてそれぞれエタノール沈殿を行ない、回収 DNA をアガロースゲル電気泳動により確認しました。 グリコーゲンを添加することで微量 DNA を効率よく回収できることを確認しました。またグリコーゲン添加後直ちに遠心操作を行っても、90％ 以上の DNA を回収できることを確認しました。

レーン 1 ：Control

レーン 2 ：グリコーゲン未添加、直ちに遠心

レーン 3 ：グリコーゲン添加（1 μL）、直ちに遠心

レーン 4 ：グリコーゲン添加（1 μL）、室温、1 時間

レーン 5 ：グリコーゲン添加（1 μL）、-30℃、1 時間

レーン 6 ：A 社　共沈剤添加（1 μL）、直ちに遠心

10,000 cells の浮遊培養細胞 HL-60 から Sepasol®-RNAⅠSuper を用いて RNA の抽出を行い、グリコーゲン添加イソプロパノール沈殿で RNA を回収しました。回収した RNA を DNase 処理し、次いで逆転写酵素 ReverTra Ace®（TOYOBO）を使って cDNA としました。さらに同一チューブで DNA ポリメラーゼ KOD Dash®（TOYOBO）を使い β-Actin（645 bp）の増幅を行いました。 共沈剤としてグリコーゲン溶液を用いて回収した RNA は、逆転写酵素に影響を与えず RT-PCR への適応が可能であることを確認しました。 ReverTra Ace、KOD Dash は東洋紡株式会社の登録商標です。

レーン 1 ：100 bp ラダーマーカー

レーン 2 ：グリコーゲン未使用

レーン 3 ：グリコーゲン 0.5 μL 使用

レーン 4 ：グリコーゲン 1 μL 使用

レーン 5 ：グリコーゲン 3 μL 使用

レーン 6 ：グリコーゲン 5 μL 使用

Sepasol® によるTotal RNA の抽出時にグリコーゲンを添加することで、細胞から RNA を効率良く回収できることが確認されました。以下にそのプロトコールを紹介します。