抗体溶出用バッファー
Arg-Antibody Elution Buffer(pH 4.0)
本製品は、抗体をプロテイン A クロマトグラフィーにより高収率、高品質に回収するための溶出緩衝液です。通常、プロテイン A からの抗体の溶出には酸性 pH 条件が必要ですが、多くの場合に会合体の生成が認められます。本製品は、溶出緩衝液にL-アルギニンを添加することで、より緩和なpH 条件にて効率的に高品質な抗体回収を実現します。
※本製品は味の素株式会社の特許の使用許諾を得て製造しています。（特許第 4826995 号）
特長
- 微酸性条件で抗体溶出が可能で、会合体形成や酸変性のリスクが低下
- プロテイン A 結合緩衝液など、他の緩衝液組成に制約なし
- アルギニン含有の溶出緩衝液として特注組成にも対応可能
製品説明
L-アルギニンによるプロテイン A からの溶出イメージ
グリシン緩衝液との溶出比較
pH 4.0 の微酸性条件において、0.1 mol/L-グリシン緩衝液では抗体はほとんど溶出しないが（レーン⑤）、アルギニン含有の本製品を用いることで効率的に抗体が回収されている（レーン⑥）。
実験方法
- COSMOGEL® Ig-Accept Protein A を D-PBS にて平衡化
- コントロールヒト血清をProtein A カラムに負荷
- カラム容量の 10 倍量のD-PBSにてProtein A カラムを洗浄
- カラム容量の 5 倍量の 0.1 mol/L-グリシン 緩衝液（pH 2.8~4.0）、もしくは Arg-Antibody Elution Buffer(pH 4.0)にて溶出し、抗体画分を回収
- SDS-PAGE にて各溶出緩衝液の回収量を確認
サンプル ① Protein Ladder One（#09547-74） ② コントロールヒト血清 ③ 0.1 mol/L-グリシン緩衝液（pH 2.8）溶出画分 ④ 0.1 mol/L-グリシン緩衝液（pH 3.4）溶出画分 ⑤ 0.1 mol/L-グリシン緩衝液（pH 4.0）溶出画分 ⑥ Arg-Antibody Elution Buffer（pH 4.0）溶出画分
使用方法
1. Protein A カラムによる抗体の精製
- ご使用中の中性 pH 緩衝液にて Protein A カラムを平衡化します。
- 抗体含有サンプルを Protein A カラムに負荷します。
- ご使用中の中性 pH 緩衝液にて Protein A カラムを洗浄します。
- カラム容量の 5 ～ 10 倍量の Arg-Antibody Elution Buffer(pH 4.0)にて抗体を溶出します。
※溶出した抗体をそのままお使いの際には、必要に応じてゲルろ過、透析などで脱塩を行ってください。
2. 溶出した抗体を陽イオン交換カラムにてさらに精製する場合
- 陽イオン交換カラムを酢酸緩衝液にて平衡化します。（酢酸緩衝液の pH は抗体の pI 値で決めてください。）
- Protein A カラムにより精製した抗体を 2 ～ 3 倍量の 20 mmol/L-酢酸緩衝液 pH 4.0 ～ 5.0 などで希釈します。
- 希釈した抗体を平衡化済みの陽イオン交換カラムに負荷します。
- 負荷後、ご使用中の低イオン強度の緩衝液にて陽イオン交換カラムを洗浄します。（本工程で、本製品の組成物は抗体とほぼ分離されます。）
- ご使用中の高イオン強度の緩衝液にて抗体を溶出します。
参考文献
- Elution of antibodies from Protein-A column by aqueous arginine solutions. Protein Expression and Purification 36(2), 244-248 (2004).
- Effective elution of antibodies by arginine and arginine derivatives in affinity column chromatography. Analytical Biochemistry 345(2), 250-257 (2005).
- Role of arginine in protein refolding, solubilization, and purification. Biotechnology Progress 20(5), 1301-1308 (2004).
- Screening of effective column rinse solvent for Protein-A chromatography. Protein Expression and Purification 70(2), 218-223 (2010).
価格表
| 製品名 | 規格 | 貯法 | 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|---|---|
| Arg-Antibody Elution Buffer(pH 4.0) | SP | 室温 （開封後、冷蔵） |
17088-15 | 500 mL |  |
本製品はフィルターでろ過滅菌済みです。防腐剤を含まないため、開封後は速やかにご使用ください。
※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。