細胞溶解液

RIPA Buffer

RIPA Buffer は界面活性剤を含んだタンパク質抽出用の緩衝液で、タンパク質の可溶化・抽出に使用されます。抽出されたタンパク質は、ウェスタンブロッティングや免疫沈降などのアプリケーションに使用できます。

製品説明
使用例
関連資料
価格表

製品説明

ラインアップ

弊社では、RIPA の基本組成で構成される 1 × 調製済み（ready to use タイプ）の製品と、プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有し、免疫沈降時に悪影響を与える可能性のある SDS を別添付した 10 倍濃縮タイプの 2 製品を販売しています。

製品名	RIPA Buffer	RIPA Buffer（10x）
製品番号	16488-34	08714-04
濃縮	1 ×（ready to use）	10 ×
プロテアーゼ阻害剤カクテル	不含	含有
SDS	含有	不含（1% SDS 溶液を添付）
保存	冷蔵	冷凍
組成	50 mmol/L Tris-HCl Buffer（pH 7.6） 150 mmol/L NaCl 1% Nonidet P40 Substitute 0.5% Sodium Deoxycholate 0.1% SDS	【1 × 溶液調製後（SDS 添加）】 50 mmol/L Tris-HCl Buffer（pH 7.6） 150 mmol/L NaCl 1% Nonidet P40 Substitute 0.5% Sodium Deoxycholate Protease Inhibitor Cocktail（1 ×）（0.1% SDS）
製品外観
容量 / セット内容	100 mL	RIPA Buffer（10x）: 2 mL × 5 本 SDS Solution（1% SDS）: 2 mL × 5 本

Nonidet はシェルブランズインターナショナルアクチェンゲゼルシャフトの登録商標です。

製品使用例

RIPA Buffer（#16488-34）

RIPA Buffer（#16488-34）は調製済みの溶液で、開封後そのまま使用できます。研究目的によっては、プロテアーゼ阻害剤やホスファターゼ阻害剤を添加して使用することも可能です。

使用例１：RIPA Buffer 抽出タンパク質の電気泳動

RIPA Buffer（#16488-34）に次の阻害剤を 1% または 2% の濃度で添加、HL-60 細胞からタンパク質を抽出し、SDS-PAGE を行いました。

プロテアーゼ阻害剤カクテル（一般用）（#04080）
プロテアーゼ阻害剤カクテル（動物細胞抽出物用）（#25955）
ホスファターゼ阻害剤カクテル（#07574-61）

サンプル

① タンパク質マーカー(10倍濃縮)（#29458-24）を 1 × に調製
② ～ ⑬ HL-60 細胞から抽出したタンパク質

泳動ゲル	:	Extra PAGE One Precast Gel, 5-20%, 13wells（#13063-74）
染色	:	CBB Stain One（#04543）

*#04080 と#25955 の双方が混合されているわけではありません。

使用例２：RIPA Buffer 抽出タンパク質のウェスタンブロッティング

Lane ④ と ⑫ について、リン酸化タンパク質の検出を行いました。

サンプル	:	④ ホスファターゼ阻害剤（#07574-61）を 1% で添加した場合 ⑫ ホスファターゼ阻害剤無添加の場合
電気泳動	:	Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 17wells（#13080-44）　400 V　10 分
転写	:	Bullet Semi-dry Transfer One（#15353-01）　25 V　10 分
ブロッキング	:	Blocking One-P（#05999-84）　20 分
抗体	:	p-Tyr 抗体 (PY20) HRP（Santa Cruz #sc-508 HRP） 2,000 倍希釈　60 分
検出	:	Chemi-Lumi One Super（#02230）

RIPA Buffer（#16488-34）にホスファターゼ阻害剤カクテル（#07574-61）を添加することにより、HL-60 細胞由来のリン酸化タンパク質は、ホスファターゼによる影響を回避することができました。

RIPA Buffer（10x）（#08714-04）

SDS Solution 添加の有無により、分析の効率を上げることができます。

使用例：SDS 添加による抽出時の効果と免疫沈降時の影響

抽出

抽出条件	:	冷 PBS で洗浄した組織切片 100 mg に対して、RIPA Buffer 300 µL を氷上で 30 分処理
染色	:	CBB Stain One（#04543）
左図	:	マウスの胃から各 RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液 ① SDS（-）RIPA ② SDS（+）RIPA ③ A 社 RIPA（SDS 入り）
右図	:	① Pre-stained Protein Markers（Broad Range）（#02525-35） ② タンパク質マーカー(10倍濃縮)（#29458-24）各組織から SDS（+）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液 ③ Mouse Liver ④ Mouse Kidney ⑤ Mouse Stomach ⑥ Mouse Brain ⑦ Mouse Heart

免疫沈降

抽出条件	:	Jurkat Cell 1.0 × 10⁷ 個に対して、RIPA Buffer 1 mL を氷上で 15 分処理 ① SDS（-）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液 ② SDS（+）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液 ③ タンパク質マーカー(10倍濃縮)（#29458-24） ④ SDS（-）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液から免疫沈降した溶液 ⑤SDS（+）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液から免疫沈降した溶液 ⑥ アガロースコントロール
一次抗体	:	β-Actin 抗体(C4)（Santa Cruz #sc-47778）
二次抗体	:	goat anti-mouse IgG-HRP（Santa Cruz #sc-2005）
左図染色	:	Sil-Best Stain One（#06865-81）
右図検出	:	Chemi-Lumi One L（#07880）

抽出時の組織溶解性は、SDS（+）の方が高い結果が得られました。一方、免疫沈降においては、SDS（-）の方が多くの β-Actin を検出しました。

顧客使用例

RIPA Buffer（10x）（#08714-04）の使用例

転写因子（SREBP-1、ChREBP）のウェスタンブロッティングによる検出

CBB 染色

サンプル	:	① SDS（+）② SDS（-）③ B 社（SDS 入り）
染色	:	CBB Stain One（#04543）

ウェスタンブロッティング

サンプル	:	① SDS（+） ② SDS（-） ③ B 社（SDS入り）
ブロッキング	:	Blocking One（#03953）
検出	:	Chemi-Lumi One L（#07880）

細胞質や核などに存在している抽出しにくいタンパク質が、効率よく抽出できました。

本データは近畿大学農学部応用生命化学科応用細胞生物学研究室　准教授森山達哉様よりご提供いただきました。

価格表

製品名	貯法	製品番号	容量	オンラインカタログへ
RIPA Buffer	冷蔵	16488-34	100 mL
RIPA Buffer(10x)	冷凍	08714-04	1 set

※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。