HistoVT One
本製品はホルマリンなどで固定した凍結切片およびパラフィン包埋した生体組織切片に対し、抗原にダメージを与えることなく、また再現性よく賦活させるのに有効な抗原賦活液です。免疫染色や in situ ハイブリダイゼーションに有効です。 本製品は、独立行政法人理化学研究所の技術*に基づき製造しております。(*特許取得)
- パラフィン包埋した切片に対し、検出の困難な抗原反応を増強
- 凍結切片に使用可能
- 調製済み試薬により高い再現性
製品説明
ホルマリン固定-パラフィン包埋における比較
使用方法
抗原賦活液の調製
本製品を精製水で 10 倍希釈し、緩やかに転倒攪拌を行いながら混合します。
パラフィン切片の場合
1. 抗原賦活液をドーゼ(ガラス容器)に入れて温浴槽で 90℃ に加温します。
2. 脱パラフィンしたスライドを溶液中に浸漬し、90℃ で 20 分、加温します。*1
(注意:インキュベート時間は、組織の種類によって異なります。また核内の物質を検出される際は 40 分加温されることをお勧めします。)
3. 抗原賦活液を精製水、あるいは緩衝液(TBS もしくは PBS)で十分に洗浄します。(3 回)
4. ブロッキングワン(#03953)などを用いてブロッキングした後、抗原抗体反応を行ってください。
凍結切片の場合
1. 抗原賦活液をドーゼ(ガラス容器)に入れて温浴槽で 70℃ に加温します。
2. ホルマリン固定し、凍結包埋した後、乾燥させた凍結切片を 70℃ で 20 分、加温します。 *1
3. 抗原賦活液を精製水あるいは緩衝液(TBS もしくは PBS)で十分に洗浄します。(3 回)
4. ブロッキングワン(#03953)などを用いてブロッキングした後、抗原抗体反応を行ってください。
(in situ ハイブリダイゼーションの一例) *2
1. 脱パラフィン処理した後、スライドを十分に洗浄します。
2. 前処理液(抗原賦活液)にスライドを浸漬し 95℃ ~ 100℃ で 40 分、加温します。*1
3. DEPC 処理水で十分に洗浄します。
4. 切片に 70% ホルムアミド・2 × SSC 液をマウントし 100℃ のヒートブロック上で 5 分加温します。
5. 切片から 70% ホルムアミド・2 × SSC 液を除いた後、ドライアイスを入れたエタノールで急冷脱水します。
6. 蛍光標識したプローブを用いて、45℃ で一晩ハイブリダイズします。
7. 0.1 × SSC で洗浄します。 緩衝液(TBS もしくは PBS)で洗浄します。
8. 緩衝液(TBS もしくは PBS)で洗浄します。
注意事項
*1
- 電子レンジを使用するマイクロウエーブ法では、サンプル中に気泡が発生したり、加温が不均一となる可能性があります。温浴槽を使用してください。
*2
- in situ ハイブリダイゼーションでは、必ず器具などは DNase・RNase フリーのものを使用してください。
- 水は、DEPC 処理水など DNase・RNase フリーの水を使用してください。
- ハイブリダイゼーションの温度やホルムアミド濃度などは、プローブの塩基組成によって異なりますので、あらかじめ最適な条件を確認した後、操作してください。
顧客使用例
凍結切片における比較
HistoVT One で処理すると、ほかの処理と比較して、顕著に抗原性が賦活化されています。 Triton はユニオン・カーバイド・コーポレーションの登録商標です。
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