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Cell Count Reagent SF
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生細胞数測定試薬

Cell Count Reagent SF

  • 細胞培養

本製品は、細胞増殖または化学物質の細胞毒性試験において、生細胞数を測定する試薬です。高水溶性ホルマザンを生成するテトラゾリウム塩 WST-8（特許第 2757348 号）を発色基質として使用することで、従来品より高感度測定が可能になりました。生成したホルマザンの吸光度を直接測定することにより、容易に生細胞数を測定できます。

特長
  • ラジオアイソトープ不要
  • 1 ボトル溶液タイプで、試薬調製不要
  • ホルマザンの溶解操作不要
  • 他の水溶性テトラゾリウム塩（XTT、MTS）より高感度
CellWell.jpg zoom

製品説明

原理

BL-57_genri.png

プロトコール比較

protokoruhikaku.png

吸収スペクトル

WST-8 ホルマザンの吸収スペクトル

p2-WST-8.png

相関グラフ

[3H]-チミジン取り込みとの相関グラフ

p2-soukangurafu.png

使用方法

細胞増殖アッセイ

  1. 対数増殖期にある細胞を目的の細胞数になるように計数し、96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 µL ずつまく*1。
  2. 炭酸ガスインキュベーター内で前培養する。
  3. 本製品を各ウェルに 10 μL ずつ添加する*2。
  4. 炭酸ガスインキュベーター内で 1 ～ 4 時間呈色反応を行う*3。
  5. マイクロプレートリーダーを用い、450 nm（参照波長 600 nm 以上）の吸光度を測定する*4。

*1 フェノールレッドを含む培地もご使用になれます。
*2 必要に応じて試薬溶液は 0.22 µm メンブレンフィルターでろ過滅菌してお使いください。
*3 細胞の種類および数により発色感度が異なりますので、十分に検討の上お使いください。
また呈色後、以下のいずれかの方法で反応を停止することができます。
① マイクロプレートを 4℃ に冷却する。
② 0.1 M HCl を 10 µL 添加する。
③ 1 w/v% SDS を 10 µL 添加する。
反応停止後 24 時間以内に測定してください。
*4 生成するホルマザン色素の極大吸収波長は 460 nm 付近にありますので、高感度に測定するためには 430 ～ 490 nm の波長フィルターをご使用ください。

p3-saibouzousyoku-.png

使用培地
HeLa DMEM（10% ウシ胎児血清含有）
HL-60 RPMI1640（10% ウシ胎児血清含有）
呈色反応
HeLa 37℃、5% CO2、1 時間（■）、2 時間（▲）
HL-60 37℃、5% CO2、1 時間（■）、3 時間（●）
測定波長
450 nm（参照波長 650 nm）

細胞毒性試験

  1. 対数増殖期にある細胞を 5,000 cell/well の濃度になるよう計数し、96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 µL ずつまく。
  2. 炭酸ガスインキュベーター内で 24 時間前培養する。
  3. 目的の濃度に調製した薬剤を各ウェルに 10 µL ずつ添加する。
  4. 炭酸ガスインキュベーター内で 48 時間培養する。
  5. 本製品を各ウェルに 10 µL ずつ添加する。
  6. 炭酸ガスインキュベーター内で 1 ～ 4 時間呈色反応を行う。
  7. マイクロプレートリーダーを用い、450 nm（参照波長 600 nm 以上）の吸光度を測定する。

p3-saiboudokusei-.png

使用細胞 HeLa
使用培地 DMEM（10% ウシ胎児血清含有）
使用薬剤 Mitomycin C（MMC）
Sodium Dodecylsulfate（SDS）
薬剤処理 37℃、5% CO2、48 時間
呈色反応 37℃、5% CO2、2 時間
測定波長 450 nm（参照波長 650 nm）

製品使用例

使用方法

細胞増殖アッセイ

  1. 対数増殖期にある細胞を目的の細胞数になるように計数し、96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 µL ずつまく*1 。
  2. 炭酸ガスインキュベーター内で前培養する。
  3. 本製品を各ウェルに 10 μL ずつ添加する*2。
  4. 炭酸ガスインキュベーター内で 1 ～ 4 時間呈色反応を行う*3。
  5. マイクロプレートリーダーを用い、450 nm（参照波長 600 nm 以上）の吸光度を測定する*4。

*1 フェノールレッドを含む培地もご使用になれます。

*2 必要に応じて試薬溶液は 0.22 µm メンブレンフィルターでろ過滅菌してお使いください。

*3 細胞の種類および数により発色感度が異なりますので、十分に検討の上お使いください。 また呈色後、以下のいずれかの方法で反応を停止することができます。

① マイクロプレートを 4℃ に冷却する。

② 0.1 M HCl を 10 µL 添加する。

③ 1 w/v% SDS を 10 µL 添加する。 反応停止後 24 時間以内に測定してください。

*4 生成するホルマザン色素の極大吸収波長は 460 nm 付近にありますので、高感度に測定するためには 430 ～ 490 nm の波長フィルターをご使用ください。

p3-saibouzousyoku-.png
使用培地
HeLa DMEM（10% ウシ胎児血清含有）
HL-60 RPMI1640（10% ウシ胎児血清含有）
呈色反応
HeLa 37℃、5% CO2、1 時間（■）、2 時間（▲）
HL-60 37℃、5% CO2、1 時間（■）、3 時間（●）
測定波長
450 nm（参照波長 650 nm）

細胞毒性試験

  1. 対数増殖期にある細胞を 5,000 cell/well の濃度になるよう計数し、96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 µL ずつまく。
  2. 炭酸ガスインキュベーター内で 24 時間前培養する。
  3. 目的の濃度に調製した薬剤を各ウェルに 10 µL ずつ添加する。
  4. 炭酸ガスインキュベーター内で 48 時間培養する。
  5. 本製品を各ウェルに 10 µL ずつ添加する。
  6. 炭酸ガスインキュベーター内で 1 ～ 4 時間呈色反応を行う。
  7. マイクロプレートリーダーを用い、450 nm（参照波長 600 nm 以上）の吸光度を測定する。
p3-saiboudokusei-.png
使用細胞 HeLa
使用培地 DMEM（10% ウシ胎児血清含有）
使用薬剤 Mitomycin C（MMC）
Sodium Dodecylsulfate（SDS）
薬剤処理 37℃、5% CO2、48 時間
呈色反応 37℃、5% CO2、2 時間
測定波長 450 nm（参照波長 650 nm）

安定性

  • 開封後頻繁に使用する場合は、遮光して 4℃ で保存し、なるべく早くお使いください。
  • 長期保存する場合は、遮光して -20℃ で保存してください。
  • 解凍は、室温に放置するか 37℃ 以下の温水で行ってください。
  • 凍結-融解操作はなるべく行わないでください。

包装単位

  • #07553-15：500 tests 用（試薬溶液 5 mL 1 本入り）
  • #07553-44：2,500 tests 用（試薬溶液 5 mL 5 本入り

試薬溶液は、WST-8*、1-Methoxy PMS の混合溶液です。 1 本で 500 テスト（96 穴マイクロプレート 5 枚分）ご使用になれます。

*株式会社同仁化学研究所より WST-8 の許可を得ています。（特許第 2757348 号）

参考文献

  • Ishiyama, M.; Miyazono, Y.; Sasamoto, K.; Ohkura, Y.; Ueno, K. Talanta. 1997, 44, p. 1299-1305.
  • Tominaga, H.; Ishiyama, M.; Ohseto, F.; Sasamoto, K.; Hamamoto, T.; Suzuki, K. and Watanabe, M. Anal. Commun. 1999, 36(2), p. 47.

関連資料

SDS

取扱説明書

価格表

製品名 規格 貯法 製品番号 容量

オンライン

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生細胞数測定試薬 SF SP 冷蔵 07553-15 500 tests e-Nacalai.jpg

07553-44

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※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。