ナカライテスク株式会社

生細胞数測定試薬

Cell Count Reagent SF

  • 細胞培養

本製品は、細胞増殖または化学物質の細胞毒性試験において、生細胞数を測定する試薬です。高水溶性ホルマザンを生成するテトラゾリウム塩 WST-8(特許第 2757348 号)を発色基質として使用することで、従来品より高感度測定が可能になりました。生成したホルマザンの吸光度を直接測定することにより、容易に生細胞数を測定できます。

特長
  • ラジオアイソトープ不要
  • 1 ボトル溶液タイプで、試薬調製不要
  • ホルマザンの溶解操作不要
  • 他の水溶性テトラゾリウム塩(XTT、MTS)より高感度
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製品説明

原理

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プロトコール比較

protokoruhikaku.png

吸収スペクトル

WST-8 ホルマザンの吸収スペクトル

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相関グラフ

[3H]-チミジン取り込みとの相関グラフ

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使用方法

細胞増殖アッセイ

  1. 対数増殖期にある細胞を目的の細胞数になるように計数し、96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 µL ずつまく*1
  2. 炭酸ガスインキュベーター内で前培養する。
  3. 本製品を各ウェルに 10 μL ずつ添加する*2
  4. 炭酸ガスインキュベーター内で 1 ~ 4 時間呈色反応を行う*3
  5. マイクロプレートリーダーを用い、450 nm(参照波長 600 nm 以上)の吸光度を測定する*4

*1 フェノールレッドを含む培地もご使用になれます。
*2 必要に応じて試薬溶液は 0.22 µm メンブレンフィルターでろ過滅菌してお使いください。
*3 細胞の種類および数により発色感度が異なりますので、十分に検討の上お使いください。
また呈色後、以下のいずれかの方法で反応を停止することができます。
① マイクロプレートを 4℃ に冷却する。
② 0.1 M HCl を 10 µL 添加する。
③ 1 w/v% SDS を 10 µL 添加する。
反応停止後 24 時間以内に測定してください。
*4 生成するホルマザン色素の極大吸収波長は 460 nm 付近にありますので、高感度に測定するためには 430 ~ 490 nm の波長フィルターをご使用ください。

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使用培地
HeLa DMEM(10% ウシ胎児血清含有)
HL-60 RPMI1640(10% ウシ胎児血清含有)
呈色反応
HeLa 37℃、5% CO2、1 時間(■)、2 時間(▲)
HL-60 37℃、5% CO2、1 時間(■)、3 時間(●)
測定波長
450 nm(参照波長 650 nm)

細胞毒性試験

  1. 対数増殖期にある細胞を 5,000 cell/well の濃度になるよう計数し、96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 µL ずつまく。
  2. 炭酸ガスインキュベーター内で 24 時間前培養する。
  3. 目的の濃度に調製した薬剤を各ウェルに 10 µL ずつ添加する。
  4. 炭酸ガスインキュベーター内で 48 時間培養する。
  5. 本製品を各ウェルに 10 µL ずつ添加する。
  6. 炭酸ガスインキュベーター内で 1 ~ 4 時間呈色反応を行う。
  7. マイクロプレートリーダーを用い、450 nm(参照波長 600 nm 以上)の吸光度を測定する。

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使用細胞 HeLa
使用培地 DMEM(10% ウシ胎児血清含有)
使用薬剤 Mitomycin C(MMC)
Sodium Dodecylsulfate(SDS)
薬剤処理 37℃、5% CO2、48 時間
呈色反応 37℃、5% CO2、2 時間
測定波長 450 nm(参照波長 650 nm)

製品使用例

安定性

  • 開封後頻繁に使用する場合は、遮光して 4℃ で保存し、なるべく早くお使いください。
  • 長期保存する場合は、遮光して -20℃ で保存してください。
  • 解凍は、室温に放置するか 37℃ 以下の温水で行ってください。
  • 凍結-融解操作はなるべく行わないでください。

包装単位

  • #07553-15:500 回用(5 mL バイアル 1 本入り)
  • #07553-44:2,500 回用(5 mL バイアル 5 本入り)
  • #07553-86:10,000 回用(100 mL バイアル 1 本入り)

試薬溶液は、WST-8*、1-Methoxy PMS の混合溶液です。 1 本で 500 テスト(96 穴マイクロプレート 5 枚分)ご使用になれます。

*株式会社同仁化学研究所より WST-8 の許可を得ています。(特許第 2757348 号)

参考文献

  • Ishiyama M, Miyazono Y, Sasamoto K, Ohkura Y, Ueno K. Talanta. 1997;44:1299-1305.
  • Tominaga H, Ishiyama M, Ohseto F, Sasamoto K, HamamotoT, Suzuki K, Watanabe, M. Analytical Communications. 1999;36(2):47.

関連資料

価格表

製品名 規格 貯法 製品番号 容量 オンラインカタログへ
生細胞数測定試薬 SF SP 冷蔵 07553-15 500 tests e-Nacalai.jpg
07553-44 2,500 tests e-Nacalai.jpg
07553-86 10,000 tests e-Nacalai.jpg

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