ジェノタイピング テイル溶解液
製品使用例
実施例 1
マウス尾を用いたジェノタイピング
操作手順

結果 1

組織 1 mg あたり約 1 μg ~ 5 μg の DNA が得られます。
また、A260/A280 の比率は約 1.8 になります。
M : λ/HindⅢ digestマーカー(TOYOBO)
1 : 抽出した DNA
↓ 精製した DNA を鋳型とした PCR を実施
結果 2

1 : 雄マウス
2 : 雌マウス
M : 100bp DNAラダー ワン(#07908-75)
PCR 条件
25 μL 反応系で PCR を実施。DNA ポリメラーゼとして KOD Dash(TOYOBO)を使用。その他試薬について KOD Dash に添付されているものを使用。(使用濃度は添付されているプロトコルに従った。)
[サンプル]
雄および雌マウス尾から操作手順に従い抽出した DNA
[PCR サイクル条件]
[プライマー]
※終濃度 0.2 μM で使用
Forward Primer : CCATGTCAAGCGCCCCATGA
Reverse Primer : GTAAGGCTTTTCCACCTGCA
[ターゲット] Sry 遺伝子(132 pb)(Y 染色体上にある遺伝子で雄のみに存在する)
雄にのみ存在する Y 染色体上の Sry 遺伝子(132 bp)が、雄由来 DNA サンプルでは増幅され、雌由来 DNA サンプルでは増幅されませんでした。このことから、正しく PCR が行われたことがわかります。
実施例 2
マウス尾を用いたジェノタイピング(簡便法)
操作手順

※希釈倍率は使用する DNA ポリメラーゼとプライマーにより大きく変わります。あらかじめ条件検討を行ってください。(希釈倍率の目安として KOD は 200 倍希釈前後、Taq は 1,000 倍希釈前後を参考にしてください。)
PCR 条件
25 μL 反応系で PCR を実施。その他試薬については DNA ポリメラーゼに添付されているものを使用。 (使用濃度は添付されているプロトコルに従った。) [PCR サイクル条件]
KOD Dash (TOYOBO) | KOD FX (TOYOBO) | TaKaRa Ex Taq® (TaKaRa) | Blend Taq® (TOYOBO) |
---|---|---|---|
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[プライマー]
※終濃度 0.2 μMで使用
Forward Primer : CCATGTCAAGCGCCCCATGA
Reverse Primer : GTAAGGCTTTTCCACCTGCA
[ターゲット]
Sry遺伝子(132 pb)(Y 染色体上にある遺伝子で雄のみに存在する)
結果
KOD Dash (TOYOBO) | KOD FX (TOYOBO) |
---|---|
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PCR 反応液 25 μL へ 8 倍希釈した上清を 1 μL 添加している。 | |
TaKaRa Ex Taq®(TaKaRa) | Blend Taq®(TOYOBO) |
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PCR 反応液 25 μL へ 40 倍希釈した上清を 1 μL 添加している。 | |
[サンプル] M : 100bp DNAラダー ワン(#07908-75) 1 : 雄マウス 2 : 雌マウス 3 : 雄マウス 4 : 雄マウス 5 : 雌マウス 6 : 雌マウス 希釈倍率 : PCR 反応溶液中の抽出液上清の希釈倍率 |
上記方法で得た上清を用いて、Y 染色体上に存在する Sry 遺伝子(132 bp)をターゲットとして PCR を行ったところ、レーン 1、3、4 番に 132 bp にバンドが認められました。それらがサンプルの性別と一致することから正しく PCR が行えたことがわかります。
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