ナカライテスク株式会社

ジェノタイピング テイル溶解液

  • 試料抽出

煩雑なジェノタイピングを簡便にする調製済みのテイル溶解液を紹介します。

特長
  • Ready to use で調製不要
  • DNase、RNase フリーなので安心
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製品使用例

実施例 1

マウス尾を用いたジェノタイピング

操作手順

Tail-1.jpg

結果 1

Tail-zu-1.gif

組織 1 mg あたり約 1 μg ~ 5 μg の DNA が得られます。
また、A260/A280 の比率は約 1.8 になります。

M : λ/HindⅢ digestマーカー(TOYOBO)
 1 : 抽出した DNA

↓ 精製した DNA を鋳型とした PCR を実施

結果 2

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1 : 雄マウス
2 : 雌マウス
 M : 100bp DNAラダー ワン(#07908-75)

PCR 条件

25 μL 反応系で PCR を実施。DNA ポリメラーゼとして KOD Dash(TOYOBO)を使用。その他試薬について KOD Dash に添付されているものを使用。(使用濃度は添付されているプロトコルに従った。)

[サンプル]

雄および雌マウス尾から操作手順に従い抽出した DNA

[PCR サイクル条件]

Tail-jyouken-1.gif

[プライマー]

※終濃度 0.2 μM で使用

Forward Primer : CCATGTCAAGCGCCCCATGA 

Reverse Primer : GTAAGGCTTTTCCACCTGCA

[ターゲット] Sry 遺伝子(132 pb)(Y 染色体上にある遺伝子で雄のみに存在する)

雄にのみ存在する Y 染色体上の Sry 遺伝子(132 bp)が、雄由来 DNA サンプルでは増幅され、雌由来 DNA サンプルでは増幅されませんでした。このことから、正しく PCR が行われたことがわかります。

実施例 2

マウス尾を用いたジェノタイピング(簡便法)

操作手順

Tail-2.jpg

※希釈倍率は使用する DNA ポリメラーゼとプライマーにより大きく変わります。あらかじめ条件検討を行ってください。(希釈倍率の目安として KOD は 200 倍希釈前後、Taq は 1,000 倍希釈前後を参考にしてください。)

PCR 条件

25 μL 反応系で PCR を実施。その他試薬については DNA ポリメラーゼに添付されているものを使用。 (使用濃度は添付されているプロトコルに従った。) [PCR サイクル条件]

KOD Dash (TOYOBO) KOD FX (TOYOBO) TaKaRa Ex Taq® (TaKaRa) Blend Taq® (TOYOBO)
Tail-jyouken1.gif tail-jyouken2.gif tail-jyouken3.gif tail-jyouken4.gif

[プライマー]

※終濃度 0.2 μMで使用

Forward Primer : CCATGTCAAGCGCCCCATGA

Reverse Primer : GTAAGGCTTTTCCACCTGCA

[ターゲット]

Sry遺伝子(132 pb)(Y 染色体上にある遺伝子で雄のみに存在する)

結果

KOD Dash (TOYOBO) KOD FX (TOYOBO)
Tail-KOD-Dash.gif Tail-KOD-FX.gif
PCR 反応液 25 μL へ 8 倍希釈した上清を 1 μL 添加している。
TaKaRa Ex Taq®(TaKaRa) Blend Taq®(TOYOBO)
Tail-TaKaRa.gif Tail-Blend.gif
PCR 反応液 25 μL へ 40 倍希釈した上清を 1 μL 添加している。
[サンプル]
M : 100bp DNAラダー ワン(#07908-75)
1 : 雄マウス
2 : 雌マウス
3 : 雄マウス
4 : 雄マウス
5 : 雌マウス
6 : 雌マウス 
希釈倍率 : PCR 反応溶液中の抽出液上清の希釈倍率 

上記方法で得た上清を用いて、Y 染色体上に存在する Sry 遺伝子(132 bp)をターゲットとして PCR を行ったところ、レーン 1、3、4 番に 132 bp にバンドが認められました。それらがサンプルの性別と一致することから正しく PCR が行えたことがわかります。

関連資料

価格表

製品名 規格 貯法 製品番号 容量 オンラインカタログへ
Tail Lysis Buffer SP 室温 06169-95 500 mL e-Nacalai.jpg

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