ナカライテスク株式会社

Cosmosil

Protein-R

  • HPLC/UHPLC
特長
  • ワイドポアタイプの C18 カラム
  • 高い回収率
  • 酸性移動相に対する高い耐酸性
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製品説明

物性

充填剤名称 Protein-R
シリカゲル 全多孔性球状高純度シリカゲル
平均粒子径(µm) 5
平均細孔径(nm) 30
比表面積(m2/g) 150
化学結合基 オクタデシル基
結合形式 ポリメリック
相互作用 疎水性相互作用
エンドキャッピング あり
使用可能 pH 範囲 1.5 〜 7.5*

シリカベースのカラムの使用推奨 pH は 2 〜 7.5 の範囲になります。推奨 pH 外での使用は可能ですが劣化を早める恐れがあります。

性能比較 1

分離性能の比較

コスモシール Protein-R は従来型の C18 ワイドポアカラムよりもタンパク質をシャープに分離します。

Protein-R-P1-bunritokusei.png
Conditions
Column size 4.6 mm I.D. × 150 mm Sample
  1. Ribonuclease A (1.0 µg)
  2. Cytochrome C (1.0 µg)
  3. Lysozyme (1.0 µg)
  4. Albumin, Bovine [BSA] (1.0 µg)
  5. Myoglobin (1.0 µg)
  6. Albumin, Egg [Ovalbumin] (1.0 µg)
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 20 min Linear gradient
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃
Detection UV 220 nm

回収率の比較

下図は各カラムのタンパク質の回収率を示しています。コスモシール Protein-R は、5C4-AR-300 や L 社 C4-30 nm 以上の回収率、また、従来の C18 カラムである 5C18-AR-300 や K 社 C18-30 nm よりも非常に高い回収率を示しました。

Protein-R-P1-kaisyuuritu.png

酸性移動相に対する耐久性の比較

下図は各カラムの酸性移動相に対する耐久性を示しています。コスモシール Protein-R は 5C4-AR-300 や L 社 C4-30 nm よりも非常に高い耐酸性を示しました。

Protein-R-P1-taikyuusei.png

0.1% トリフルオロ酢酸水溶液を封入、60℃ での分解試験
保持係数(k)はメタノール / 水 = 50 / 50 移動相でのナフタレンの値

性能比較 2

他社比較

コスモシール Protein-R は従来型の他社ワイドポアカラムよりもタンパク質をシャープに分離します。

Protein-R-P2-tasyahikaku.png
Conditions
Column size 4.6 mm I.D. × 150 mm Sample 1.0 µg each
  1. Ribonuclease A (MW:13,700)
  2. Cytochrome C (MW:12,400)
  3. Lysozyme (MW:14,300)
  4. BSA (MW:66,000)
  5. Myoglobin (MW:17,000)
  6. Ovalbumin (MW:45,000)
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 20 min Linear gradient
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃
Detection UV 220 nm

細孔径の比較

一般的な C4(30 nm)と C18(30 nm)の weak point と strong point

Protein-R-P4-seinou.png

製品使用例

分析例 1

糖タンパク質

ap-0352.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm 
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 20 min Linear gradient
Sample Concanavalin A (1.0 µg)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

豆乳タンパク質

ap-1080.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm
Mobile phase A; 0.05% TFA-H2O
B; 0.05% TFA-Acetonitrile
B conc. 20 → 80% 20 min Linear gradient
Sample Soybean milk
Flow rate 1.0 mL/min Sample Preparation
  • Ultracentrifuged at 90,000 g for 1 hr.
  • Clear supernatant solution was injected.
Temperature 30℃ Inj. Vol. 1.0 µL

牛乳タンパク質

ap-1079.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm
Mobile phase A; 0.05% TFA-H2O
B; 0.05% TFA-Acetonitrile
B conc. 20 → 80% 20 min Linear gradient
Sample Milk
Flow rate 1.0 mL/min Sample Preparation
  • Ultracentrifuged at 90,000 g for 1 hr.
  • Clear supernatant solution was injected.
Temperature 30℃ Inj. Vol. 1.0 µL

細菌由来タンパク質

ap-0337.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm 0.256 AUFS
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Sample
  1. Choline Oxidase (6.0 µg)
  2. α-Amylase (3.0 µg)
  3. Glucose Oxidase (6.0 µg)
  4. Thermolysin (9.0 µg)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

分析例 2

ヒト由来タンパク質

ap-0339.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm 0.256 AUFS
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Sample
  1. Transferrin (1.5 µg)
  2. Albumin, Human (2.0 µg)
  3. Carbonic Anhydrase (1.0 µg)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

ウシ脾臓由来タンパク質

ap-0342.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm 0.256 AUFS
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Sample
  1. Ribonuclease A (1.0 µg)
  2. α-Chymotrypsinogen A (1.0 µg)
  3. Deoxyribonuclease I (3.0 µg
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

粗精製ミオシン

ap-0346.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm 0.256 AUFS
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Sample Myosin (20 µg)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

粗精製ジアフォラーゼ

ap-0347.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm 0.256 AUFS
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Sample Diaphorase (6.0 µg)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

ピルベートキナーゼ

ap-0348.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm 0.256 AUFS
Mobile phase A; 0.05% TFA-20% Acetonitrile
B; 0.05% TFA-60% Acetonitrile
B conc. 0 → 100% 10 min Linear gradient
Sample Pyruvate Kinase (4.0 µg)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

分析例 3

ペプチド

ap-0350.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 220 nm
Mobile phase A; 0.05% TFA-H2O
B; 0.05% TFA-Acetonitrile
B conc. 10 → 40% 20 min Linear gradient
Sample
  1. Oxytocin (0.8 µg)
  2. Angiotensin II(Human) (0.8 µg)
  3. Angiotensin I(Human) (0.8 µg)
  4. Substance P (0.8 µg)
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

オリゴヌクレオチド

ap-1064.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
4.6 mm I.D. × 150 mm
Detection UV 260 nm
Mobile phase A; 100 mmol/L Ammonium Acetate
B; Acetonitrile
B conc. 9 → 11% 15 min Linear gradient
Sample pd(T)12-18
Flow rate 1.0 mL/min
Temperature 30℃

食品添加物に指定されたナイシン(Nisin)の分析

ナイシン(Nisin)は、代表的なバクテリオシンのひとつであり、Lactococcus lactis subsp. lactis が産出する 34 個のアミノ酸から成るペプチドです。 ナイシン(Nisin)は、ランチオニンなどの特殊な構造のアミノ酸を含んでおり、ランチビオティクス系のバクテリオシンに分類されています。 ナイシン(Nisin)は、バチルス属やクロストリジウム属の細菌芽胞に対して効果的に作用し、現在 50 カ国以上で保存料として使用されています。

日本でも 2009 年 3 月 2 日にナイシンが食品添加物として指定されました。
財団法人日本食品化学研究振興財団では、「ナイシン試験法」(PDF 381 KB)を公開しています。
その中で、測定法の測定条件のカラムとして、オクタデシルシリル化シリカゲル(粒子径 5 μm、細孔径 300 Å、内径 2.0 〜 4.6 mm、長さ 150 〜 250 mm)が指定されています。
C18 系カラムは、各社多種多様なものがありますが、コスモシール Protein-R カラムが良好なピークを示したと紹介されています。

nisin.png

ペプチドの分離

分子量の小さなペプチドには細孔径 12 nm のコスモシール 5C18-AR-II が高い分離能を示しますが、分子量の大きいペプチドには Protein-R が良い分離を示します。

Protein-R-P4-peptido.png
Conditions
Column size 4.6 mm I.D. × 150 mm Temperature 30℃
Mobile phase A: 0.05% TFA-H2O
B: 0.05% TFA-Acetonitrile
B conc. 0 → 35% 60 min Linear gradient
Detection UV 220 nm
Flow rate 1.0 mL/min Sample Poly-L-Glutamic Acid Sodium Salt
(MW 1,500 ~ 5,000)(200 µg)

分取精製へ

Protein-R-P4-bunsyu.png

顧客使用例

Tau タンパク質

ap-1150.png
Conditions
Column COSMOSIL Protein-R 
20 mm I.D. × 250 mm
Detection UV 215 nm
Mobile phase A; 0.1% TFA-H2O
B; 0.1% TFA-Acetonitrile
B conc. 20%(0-13 min), 20 → 50%(13-43 min)
Sample Recombinant human tau (2N4R)
Flow rate 9.0 mL/min Data courtesy of Akihiko Takashima, Ph.D.
Laboratory for Alzheimer's Disease, RIKEN Brain Science Institute
Temperature Room temperature

関連資料

価格表

分析・分取カラム(粒子径 5 µm)
COSMOSIL Protein-R

製品名 サイズ 製品番号 オンラインカタログへ
COSMOSIL Protein-R Guard Column / Guard Cartridge 4.6 mm I.D. × 10 mm Cartridge 21249-04 e-Nacalai.jpg
10 mm I.D. × 20 mm 06528-01 e-Nacalai.jpg
20 mm I.D. × 20 mm 08692-81 e-Nacalai.jpg
COSMOSIL Protein-R Packed Column 2.0 mm I.D. × 150 mm 06514-71 e-Nacalai.jpg
4.6 mm I.D. × 50 mm 06525-31 e-Nacalai.jpg
4.6 mm I.D. × 150 mm 06526-21 e-Nacalai.jpg
4.6 mm I.D. × 250 mm 06527-11 e-Nacalai.jpg
10 mm I.D. × 150 mm 06529-91 e-Nacalai.jpg
10 mm I.D. × 250 mm 06530-51 e-Nacalai.jpg
20 mm I.D. × 150 mm 06531-41 e-Nacalai.jpg
20 mm I.D. × 250 mm 06532-31 e-Nacalai.jpg

* Guard Cartridge は 2 個入りです。別途にカートリッジホルダーが必要です。

※上記以外のカラムサイズをご要望の際はお問い合わせください。

※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。