WB 剥離溶液はどのような製品ですか？

本製品はウェスタンブロッティングにおいて化学発光法で抗原を検出後、メンブレンから抗体を剝がすための抗体剥離液です。 本製品を使用後、同じメンブレンで異なる抗体を用いた抗原抗体反応を行うことが可能です。

使用方法を教えてください。

化学発光法で検出後のメンブレンを tTBS または tPBS で洗浄し、本製品に浸して、5 ～ 15 分振とうします。 再度、tTBS または tPBS で洗浄後、新たに抗体反応を行ってください。使用方法の詳細は、取扱説明書をご参照ください。

WB 剥離溶液（#05364）と WB 剥離溶液ストロング（#05677）の違いを教えてください。

抗体を剥離する原理が異なります。 WB 剥離溶液（#05364）は、pH とタンパク質変性剤の作用により抗体を変性させることで剥離させるのに対して、WB 剥離溶液ストロング（#05677）は、還元剤と界面活性剤の作用により抗体を変性させることで剥離させます。抗体との相性によって剥離効果が変わるため、初回ご使用時には、両製品をお試しできる WB 剥離溶液トライアルセット（#05680）にて予備検討することを推奨しております。他にも使用方法の違い等が当社 HP および BULLETIN L-91 に掲載されておりますので、ご参照ください。

残存抗体を確認する方法を教えてください。

標識抗体をご使用の場合、本製品で処理した後のメンブレンをそのまま化学発光法で検出してご確認ください。 未標識の抗体をご使用の場合、本製品で処理した後のメンブレンを 2 次抗体（標識抗体）と反応させた後、化学発光法で検出してご確認ください。

WB 剥離溶液（#05364）および WB 剥離溶液ストロング（#05677）を用いて、抗体がうまく剥がれない場合、改善策はありますか？

抗原抗体反応の強さにより、5 ～ 15 分間の処理条件ではメンブレン上に結合した抗体が残存する場合があります。 30 分 ～ 数時間に処理時間を延長するか、37 ～ 60℃ 程度で加温処理を行ってください。それでも剥離しない場合は、剥離原理の異なるもう一方の WB 剥離溶液をお試しください。

WB 剥離溶液（#05364）および WB 剥離溶液ストロング（#05677）を用いて抗体を剥がした後、2 回目の検出において感度が低下した場合、改善策はありますか？

検出感度が下がった原因として、下記が考えられます。 ① タンパク質が変性している。 ② タンパク質がメンブレンから剥がれている。 ① が原因の場合、剥離原理の異なるもう一方の WB 剥離溶液をお試しいただくと、検出感度が改善される可能性があります。一方、② が原因の場合、細孔径の小さいメンブレンに変更いただくことで（現在 0.45 um であれば 0.2 um に変更）改善される可能性があります。

WB 剥離溶液（#05364）と WB 剥離溶液ストロング（#05677）を交互に使用することは可能ですか？

可能です。 ただし、2 つの製品を混合すると、両製品が反応して白い沈殿を生じます。そのため、交互に使用される際は、剥離後のメンブレンを適当な緩衝液または精製水で 3 ～ 5 回程度洗浄して、試薬を完全に取り除いてから次の試薬を後使用ください。なお、トレー等はそれぞれ別のものをご使用ください。

ペルオキシダーゼﾞ染色キットを用いてメンブレンの染色を行った後、WB 剥離溶液（#05364）および WB 剥離溶液ストロング（#05677）を用いて、ストリッピング・再染色を行うことは可能ですか？

ペルオキシダーゼﾞ染色キットで染色後、ストリッピング・再染色を行うことはできません。 ペルオキシダーゼﾞ染色キットに限らず発色基質を用いた染色方法では、メンブレン上に沈着していた基質の色素を剥がすことはできません。したがって、再染色を行われる場合は、ペルオキシダーゼ検出に発光基質を用いた、ケミルミワンシリーズ（#07880、#02230、#11644）を推奨しております。

WB 剥離溶液（#05364）および WB 剥離溶液ストロング（#05677）を用いて、ビオチン化したタンパク質とアビジン融合プローブとの結合を外すことは可能ですか？

WB 剥離溶液（#05364）を用いてビオチンとアビジンの結合を解離可能か確認したデータを保有しておりませんが、ビオチンとアビジンの結合は強く、本製品による剥離は困難であると考えられます。 WB 剥離溶液ストロング（#05677）でも剥離した事例はございませんので、予備検討を行っていただく必要があります。

WB 剥離溶液（#05364）および WB 剥離溶液ストロング（#05677）を用いて、蛍光標識抗体を剥離することは可能ですか？

どちらの製品においても、蛍光標識抗体の剥離が可能か確認しておりません。 したがって、予備検討を行っていただく必要があります。

化学発光法で検出後のメンブレンを冷蔵保存しておき、数日後に WB 剥離溶液（#05364）および WB 剥離溶液ストロング（#05677）を使用することは可能ですか？

可能です。 どちらの製品も、検出直後のメンブレンでなくでも、問題なく抗体を剥がすことができます。ただし、メンブレンが乾燥した状態で本製品を使用することは推奨しておりません。

WB 剥離溶液（#05364）および WB 剥離溶液ストロング（#05677）を用いて、何回メンブレンを再利用することができますか？

化学発光法を用いた検出では 2 ～ 5 回のメンブレンの再利用が可能です。 回数に比例して感度は減衰しますので、上記以上の再利用は推奨しておりません。

WB 剥離溶液（#05364）および WB 剥離溶液ストロング（#05677）を用いて剥がした抗体を、アフィニティー精製することで再利用することは可能ですか？

保証外です。 どちらの製品も、検出後に抗体を剥がすことで、同じメンブレンに別の抗体を作用させることを目的としています。