ナカライテスク株式会社

RIPA Bufferの代替に

Cell Lysis Buffer

  • 試料抽出

Cell Lysis Buffer は RIPA Buffer と同様にタンパク質を抽出するための細胞溶解液です。Ready to use タイプと、免疫沈降時に悪影響を与える可能性がある SDS を別添した 10 倍濃縮タイプの 2 タイプをご用意しています。

特長
  • RIPA Buffer と同様にタンパク質抽出が可能
  • REACH規制対象物質である OPE/NPE*(NP-40 など)不使用
  • 選べる 2 タイプ

*オクチルフェノールエトキシレート (OPE)/ノニルフェノールエトキシレート (NPE) :水生生物に対して毒性を示す。

製品説明

ラインアップ

以下の 2 タイプの製品をご用意しています。

製品名 Cell Lysis Buffer Cell Lysis Buffer (10x)
製品タイプ 1 ×(ready to use) 10 ×
プロテアーゼ阻害剤カクテル 不含 含有
SDS 含有 不含(10 × SDS 溶液を別添)
貯法 冷蔵 冷凍

 

他社比較:Cell Lysis Buffer または他社 RIPA Buffer を用いたタンパク質の抽出

CBB 染色

L168-tasyahikaku-cbb.png
実験条件
サンプル : ① 本製品を用いて抽出したタンパク質(15 µg)
② A 社 RIPA Buffer を用いて抽出したタンパク質(15 µg)
③ Protein Ladder One Plus, Triple-color for SDS-PAGE(#19593-25)
SDS-PAGE : Bullet PAGE Plus Precast Gel, 5-15%, 13wells(#21791-84)400 V
染色 : Bullet CBB Stain Lite(#21964)

ウェスタンブロッティング

本製品または A 社 RIPA Buffer を用いてマウスの肝臓からタンパク質を抽出し、ウェスタンブロッティングにより 3 種類のタンパク質を検出しました。本製品は A 社 RIPA Buffer と同様に、ウェスタンブロッティングに適用可能であることが示されました。

L168-tasyahikaku-wb.png
実験条件
サンプル : ① 本製品を用いて抽出したタンパク質
② A 社 RIPA Buffer を用いて抽出したタンパク質
[β-Actin] 7 µg
[PCNA]   7 µg
[EGFR]   28 µg
SDS-PAGE : Bullet PAGE Plus Precast Gel, 5-15%, 13wells(#21791-84)400 V
転写 : Bullet Semi-dry Transfer One(#15353-01)25 V
ブロッキング : Bullet Blocking One for Western Blotting(#13779)
一次抗体 : [β-Actin] β-Actin 抗体(C4)(Santa Cruz #sc-47778)1,000 倍希釈
[PCNA]   PCNA 抗体(Novus #NB100-456)1,000 倍希釈
[EGFR]   EGFR 抗体(CST #4267)2,000 倍希釈
二次抗体 : [β-Actin] Anti-Mouse IgG HRP(#21860)20,000 倍希釈
[PCNA]   Anti-Rabbit IgG HRP(#21858)20,000 倍希釈
[EGFR]   Anti-Rabbit IgG HRP(#21858)20,000 倍希釈
検出 : Chemi-Lumi One Super(#02230)

使用例 1:Cell Lysis Buffer を用いて抽出したリン酸化タンパク質の検出

Protein Kinase C を活性化処理した HEK293 細胞から、本製品を用いてタンパク質を抽出し、ウェスタンブロッティングにより ERK および pERK を検出しました。

L168-siyourei1.png
実験条件
サンプル : ① HEK293 細胞から抽出したタンパク質(Control; 10 µg)
② PKC 活性化処理済み HEK293 細胞から抽出したタンパク質(10 µg)
SDS-PAGE : Bullet PAGE Plus Precast Gel, 5-15%, 13wells(#21791-84)400 V
転写 : Bullet Semi-dry Transfer One(#15353-01)25 V
ブロッキング : Bullet Blocking One for Western Blotting(#13779)
一次抗体 : [ERK]   ERK 抗体(Santa Cruz #sc-514302)2,000 倍希釈
[pERK] pERK 抗体(CST #4370S)2,000 倍希釈
二次抗体 : [ERK]   Anti-Mouse IgG HRP(#21860)20,000 倍希釈
[pERK] Anti-Rabbit IgG HRP(#21858)20,000 倍希釈
検出 : Chemi-Lumi One Super(#02230)

 

使用例 2:Cell Lysis Buffer(10x) を用いたタンパク質の抽出

CBB 染色

SDS を添加した本製品を用いて、マウスの各臓器からタンパク質を抽出し、電気泳動後、CBB 染色を行いました。

L168-siyourei2-cbb.png
実験条件
サンプル : ①, ⑦ Protein Ladder One Plus, Triple-color for SDS-PAGE(#19593-25)  
② 脳から抽出したタンパク質(12 µg)
③ 心臓から抽出したタンパク質(12 µg)
④ 肝臓から抽出したタンパク質(12 µg)
⑤ 腎臓から抽出したタンパク質(12 µg)
⑥ 胃から抽出したタンパク質(12 µg)
SDS-PAGE : Bullet PAGE Plus Precast Gel, 5-15%, 13wells(#21791-84)400 V
染色 : Bullet CBB Stain Lite(#21964)

 

免疫沈降

SDS を添加していない本製品を用いて、GFP を発現させた HEK293 細胞からタンパク質を抽出し、ラット抗 GFP 抗体結合アガロースビーズを用いて免疫沈降を実施しました。免疫沈降前後のサンプルについてウェスタンブロッティングにより GFP を検出しました。

L168-siyourei2-menekitinkou.png
実験条件
免疫沈降 : 抗 GFP(ラット IgG2a), モノクローナル(GF090R), CC, アガロース(#06083-05)
サンプル : ① 免疫沈降前のサンプル(3 µL)
② 免疫沈降後のサンプル(3 µL)
SDS-PAGE : Bullet PAGE Plus Precast Gel, 5-15%, 13wells(#21791-84)400 V
転写 : Bullet Semi-dry Transfer One(#15353-01)25 V
ブロッキング : Bullet Blocking One for Western Blotting(#13779)
一次抗体 : Anti-GFP(Mouse IgG1-κ) (#04363)5,000 倍希釈
二次抗体 : Anti-Mouse IgG HRP(#21860)20,000 倍希釈
検出 : Chemi-Lumi One Super(#02230)

価格表

製品名 規格 貯法 製品番号 容量

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Cell Lysis Buffer SP
(生化学研究用)
冷蔵 22352-04 100 mL e-Nacalai.jpg
Cell Lysis Buffer(10x) 冷凍 22353-81 1 set e-Nacalai.jpg