Lumitein Protein Gel Stain
Biotium 社はさまざまな蛍光色素を開発しているメーカーです。高感度で簡略化されたプロトコールによりシンプルかつスピーディーにタンパク質を検出することができます。
- 固定・洗浄・脱色不要
- 高感度検出
- トランスイルミネーター（UV ＋ EtBr フィルター）で観察可能
- 染色後の MS やシークエンス解析が可能
- 幅広い波長で励起可能
- 幅広い濃度において定量性あり
製品説明
他の染色法との比較
Lumitein は、高感度かつ簡便なタンパク質の蛍光染色試薬です。他の蛍光染色試薬や一般的な CBB 染色法、銀染色法よりも簡単な操作で高感度に検出できます。
| 蛍光染色試薬 | 一般的な銀染色法 | 一般的な CBB 染色法 | |||
|---|---|---|---|---|---|
| Lumitein | A 社製品 | B 社製品 | |||
| 固定・洗浄・脱色の操作 | 不要 | 不要 | 必要 | 必要 | 必要 |
| 総操作時間 | 基本法：約 90 分 迅速法：約30分 |
約 90 分 | オーバーナイト以上 | 約 2 時間 | 数時間 |
| 感度 | 1 ng 以下 | ng オーダー | 0.25 ～ 1ng | 数 ng ～ 1ng 以下 | 数十 ng |
*脱色・洗浄操作は不要ですがお好みで行うことができます。操作は脱色 5 分（30% メタノール、15% 酢酸）、洗浄 5 分（水）です。
*Lumitein の染色時間は、迅速法 30 分でも染色像は確認できますが、最高感度の検出は基本法の 90 分を推奨しています。
Lumitein の励起・蛍光スペクトル
Lumitein の UV 最大励起波長は 280 nm 付近で、可視励起波長は 450 nm を中心に広範囲に及んでいます。蛍光波長は 610 nm 付近で明るい赤色の蛍光を発します。
Lumitein に対応する励起光源・フィルターと蛍光フィルター
Lumitein で染色したゲルは、300 nm UV トランスイルミネーター、470 nm blue LED トランスイルミネーター、レーザースキャナー（450 nm、473 nm、488 nm、532 nm）等種々の装置で観察できます。最大感度を得るためには、蛍光フィルターに 490 nm のロングパスフィルターをご使用ください。詳しくは下の表をご参照ください。
| 適切な励起光源・フィルター | 300nm UV, 365nm UV, 450±15 (filter), 470nm blue LED, 473nm laser, 480nm excitation interference filter (epi-illumination), 485±4.5nm (monochromator), 488nm laser, 532nm laser. |
|---|---|
| 適切な蛍光フィルター | 490nm longpass (best), 515nm longpass, 520nm longpass, 580nm longpass, 590nm longpass, 595±4.5nm (monochromator, Molecular Devices), ethidium bromide filter, 600nm bandpass, 600±20nm, 600±35nm, 610nm longpass, 610±35nm, 618nm bandpass, 620nm bandpass, 625±15nm, 625±T15nm, Texas Red filter (～630nm bandpass), 640±35nm |
製品使用例
高感度検出
タンパク質マーカーを 2 倍希釈系列で泳動後、Lumitein（脱色・洗浄ステップ有り）で染色したところ、0.2 ng 以下のタンパク質も検出できました。データは Cytiva Typhoon Trio を用いて取得しました （ex.532nm、610BP30 フィルター）。本製品は、脱色・洗浄操作は不要ですが、お好みで行うことができます。操作は脱色 5 分（30% メタノール、15% 酢酸）、洗浄 5 分（水）です。
二次元電気泳動後のゲルの染色
ヒト肝臓由来のタンパク質抽出物を Lumitein により染色しました。3 つの円内のスポットを MS 解析した結果、本試薬は MS に適合することが確認できました。
CBB 染色法との比較
タンパク質マーカーを 2 倍希釈系列で泳動後、Lumitein（データ左）、CBB（データ右）で染色しました。Lumitein で染色したデータは、EtBr フィルター（UVP 社）を装着した UV ボックスにより検出しました。CBB 染色したデータは、白色光コンバータ（UVP 社）を用いて検出しました。その結果、CBB 染色法よりも簡単な操作で、高感度に検出できることが示されています。
顧客使用例
Lumitein 染色後の UV 検出
分子量マーカーの SDS-PAGE （12.5%）
| Protein | Mr | Amount (ng/lane) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Dilution Factor | |||||||
| 40 | 80 | 160 | 320 | 640 | 1280 | ||
| Phosphorylase b | 97,000 | 41.9 | 20.9 | 10.5 | 5.2 | 2.6 | 1.3 |
| Albumin | 66,000 | 51.9 | 25.9 | 13.0 | 6.5 | 3.2 | 1.6 |
| Ovalbumin | 45,000 | 91.9 | 45.9 | 23.0 | 11.5 | 5.7 | 2.9 |
| Carbonic anhydrase | 30,000 | 51.9 | 25.9 | 13.0 | 6.5 | 3.2 | 1.6 |
| Trypsin inhibitor | 20,100 | 50.0 | 25.0 | 12.5 | 6.3 | 3.1 | 1.6 |
| α-Lactalbumin | 14,400 | 72.5 | 36.3 | 18.1 | 9.1 | 4.5 | 2.3 |
サンプル：
脱色：なし
洗浄：蒸留水を加えて軽くリンス
撮影：ImageQuant LAS4000 （Cytiva） 感度-スタンダード 光源- 312 nm UV 透過 フィルター- 605 EtBr 露光時間- 1/30 sec
価格表
| 製品名 | メーカー製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|
| Lumitein Protein Gel Stain, 1X | 21001 | 200 mL |  |
| 21001-1 | 1 L | |
|
| 21001-2 | 5×1 L | |
|
| Lumitein Protein Gel Stain, 100X | 21002 | 2 mL | |
| 21002-1 | 10 mL | |
|
| 21002-2 | 50 mL | |
貯法：冷蔵または室温（遮光）で 1 年間保存可能
※掲載内容は、2015 年 11 月現在の情報に基づいています。