TriLink BioTechnologies 社 CleanCap® IVTキット
TriLink BioTechnologies 社（以下 TriLink 社）は、mRNA を合成するための in vitro 転写（IVT）キットを提供しています。このキットには、キャッピング効率の高い CleanCap® 試薬が含まれています。さらに IVT に必要な酵素やバッファーも最適化しており、CleanCap® 試薬の使用量を抑えつつ、高品質な mRNA を高収量に合成できるため、コストパフォーマンスも優れています。
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- CleanCap® 試薬が同梱
- IVT の最適化で CleanCap® 試薬を節約
- 改良 RNA ポリメラーゼで dsRNA の生成を抑制
製品説明
CleanCap® 試薬の性能
TriLink 社が開発した独自のキャッピング試薬 CleanCap® 試薬は、ワンポットで Cap 1 構造を付加することができ、さらにキャッピング効率が高いため、従来と比べて翻訳効率の高い mRNA を合成することが可能です。
IVT の最適化：高収量
キットに含まれるバッファーは、in vitro 転写を最適化（CleanScript IVT）しており、従来と比べて収量が最大 2 倍に増加したことが示されています。
TriLink 社の CleanScript IVT プロトコルに従った場合、標準プロトコルに比べて、4 つのコンストラクトにおいて mRNA 収量が最大 2 倍の 10 mg/mL に増加しました。
IVTの最適化：CleanCap® 試薬を節約
反応液を 20 µL に調製した場合は 125 回分、100 µL に調製した場合は 25 回分になります。IVT 反応を最適化しているため、CleanCap® 試薬は、NTP に対して 2:5 のモル比で使用できます。
| Component | Final concentration | Amount per 20 µL rxn | Amount per 100 µL rxn |
|---|---|---|---|
| DNase/RNase-free water | N/A | X µL | X µL |
| 10X AG CleanScript IVT Buffer | 1X | 2 µL | 10 µL |
| ATP (100 mM) | 10 mM | 2 µL | 10 µL |
| CTP (100 mM) | 10 mM | 2 µL | 10 µL |
| GTP (100 mM) | 10 mM | 2 µL | 10 µL |
| UTP (100 mM) or N1Ψ (100 mM) | 10 mM | 2 µL | 10 µL |
| CleanCap® AG (3′ OMe) (100 mM) | 4 mM | 0.8 µL | 4 µL |
| DNA template Linearized plasmid OR PCR template |
50 µg/mL 25 µg/mL |
1 µg 0.5 µg |
5 µg 2.5 µg |
| AG CleanScribe RNA Polymerase Mix (10X) | 1X | 2 µL | 10 µL |
| Total Volume | N/A | 20 µL | 100 µL |
CleanCap® IVT キットのプロトコルはこちらからダウンロードできます。
dsRNA の生成を抑制
キットには、TriLink 社が開発した CleanScribe RNA ポリメラーゼが含まれており、dsRNA の生成が抑えられるため、mRNA の翻訳効率が高められます。
CleanScribe RNA ポリメラーゼおよび野生型（WT）T7 RNA ポリメラーゼを比較した結果、N1-メチルシュードウリジン（N1MePsU）修飾の有無にかかわらず、3 つの mRNA コンストラクトにおける dsRNA 形成が、大幅に減少しました。
CleanScribe RNA ポリメラーゼで作成された mRNA を使用した場合、WT T7 RNA ポリメラーゼで作成された mRNA を使用した場合よりも、A549-Dual 細胞での免疫応答が低いことが示されています（Poly(I:C) および 3p-hpRNA はポジティブコントロール）。
CleanScribe RNA ポリメラーゼで合成した mRNA を使用することで、WT T7 RNA ポリメラーゼよりも、dsRNA の生成量が抑制されるため、A549 細胞におけるタンパク質発現が向上しています。
キット構成品
| Component | Concentration | Amount |
|---|---|---|
| CleanCap® Reagent AG (3′ OMe) | 100 mM | 10 µmol |
| Adenosine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
| Cytidine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
| Guanosine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
| Uridine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
| N1-Methyl-Pseudouridine-5′-Triphosphate | 100 mM | 100 µmol |
| AG CleanScribe RNA Polymerase Mix | 10X | 250 µL |
| 10X AG CleanScript IVT Buffer | 10X | 1 mL |
| FLuc Control Plasmid | 0.5 µg/µL | 25 µg |
関連資料
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価格表
| 製品名 | メーカー製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
|---|---|---|---|
| CleanCap® AG (3’OMe)CleanScript IVT Kit | K-7413-25 | 125 rxns（20 μL scale） |  |
CleanCap は TriLink BioTechnologies, LLC の登録商標です。
※掲載内容は 2025 年 6 月現在の情報に基づいています。