製品情報

アポトーシス検出キット(Annexin V-FITC / Annexin V-633)

本製品は蛍光標識したアネキシン V と PI を利用し、初期のアポトーシスと後期のアポトーシスが検出可能なキットです。FITC または赤色蛍光色素を標識したアネキシン V から構成される、2 種類の検出キットをラインアップしています。

特長

  • 簡便にアポトーシス初期、アポトーシス後期の観察が可能
  • 細胞の固定は不要
  • フローサイトメトリーまたは蛍光顕微鏡で検出可能

ラインアップ

製品名 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit Annexin V-633 Apoptosis Detection Kit
励起 / 蛍光 アネキシン V-FITC(494 nm / 518 nm)
PI(535 nm / 617 nm)
アネキシン V-633(650 nm / 666 nm)
PI(535 nm / 617 nm)
キット構成 アネキシン V-FITC 溶液
PI 溶液
アネキシン V 結合溶液(10x)
アネキシン V-633 溶液
PI 溶液
アネキシン V 結合溶液(10x)

原理

Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit の例

正常細胞アポトーシス初期アポトーシス後期
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正常な細胞では、膜りん脂質であるホスファチジルセリン(PS)が細胞膜の内側に存在するため、アネキシン V に認識されません。アポトーシス初期の細胞では、細胞膜構造は維持したまま PS が細胞表面に露出してくるため、アネキシン V-FITC に認識されて細胞表面だけが緑(FITC)に染色されます。アポトーシス後期の細胞では、細胞内に PI が取り込まれるようになり、細胞内が赤(PI)に染色されます。

Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

実施例 1

アポトーシス誘導細胞の蛍光画像

明視野観察蛍光観察

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Jurkat 細胞に 1 µg/mL のスタウロスポリンを 37 ℃で 3.5 時間作用させてアポトーシスを誘導し、蛍光顕微鏡で観察した。

アネキシン V-FITC(緑)
PI(赤)

実施例 2

アポトーシス誘導細胞のフローサイトメトリー解析

コントロール(未処理)アポトーシス誘導細胞

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Jurkat 細胞に 1 µg/mL のスタウロスポリンを 37 ℃で 3.5 時間作用させてアポトーシスを誘導し、フローサイトメーターで解析した。

性能比較

アポトーシス検出キット性能比較

コントロール(未処理)シクロヘキシミド処理UV 処理
A 社製品 image04-1.png image04-2.png image04-3.png
本製品 image04-4.png image04-5.png image04-6.png

細胞種 :マウス B16 メラノーマ細胞
細胞数 :10,000 個
検出装置:Gallios(Beckman Coulter, Inc.)

シクロヘキシミドおよび UV 照射(1 µg/mL)によりアポトーシスを誘導し(37 ℃、3.5 時間)、フローサイトメーターで解析したところ、本キットは A 社製品と同等の性能を有していることを示した。

未処理においては、アポトーシスは認められなかった。シクロヘキシミドでアポトーシスを誘導すると、アポトーシス初期の細胞が多数確認できた。また UV 処理した細胞でもアポトーシスが確認できた。

-- :アネキシン V-FITC および PI の双方共に蛍光値が低い。生細胞領域。
+- :アネキシン V-FITC の蛍光値は高く、PI は低い。アポトーシス初期。
++ :アネキシン V-FITC および PI の双方共に蛍光値が高い。アポトーシス後期。

データご提供:京都大学大学院 薬学研究科 病態情報薬学 高橋 有己 助教

性能評価

アポトーシス検出キット性能評価

コントロール(未処理)飢餓状態(48 時間)
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細胞種 :U-87 MG 細胞
検出装置:Tali® イメージサイトメーター(Thermo Fisher Scientific Inc.)

グルコースを除き飢餓状態(48 時間)によりアポトーシスを誘導し、イメージングサイトメーターで解析したところ、アポトーシス初期の細胞が確認できた。

データご提供: 京都府立医科大学大学院 医学研究科 生体情報・機能形態学分野
神経発生生物学(生物学教室) 後藤 仁志 講師

<商標について>
・Tali® は Thermo Fisher Scientific Inc. の登録商標です。

Annexin V-633 Apoptosis Detection Kit

実施例

アポトーシス誘導細胞の蛍光画像

ピューロマイシン処理アクチノマイシン処理
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細胞種 :10T1/2 細胞 線維芽細胞
検出装置:共焦点レーザ走査型顕微鏡 FLUOVIEW FV1000(オリンパス株式会社)

データ左) ピューロマイシンを 2.5 μg/mL の濃度で 6 時間処理した後、20 倍の対物レンズを用いて観察した。右の細胞がアポトーシスの初期で、アネキシン V-633 のみにより染色されている(白く光っている部分)。左側の細胞はアポトーシスの後期で PI により核も染色されている(赤色の部分)。
データ右) アクチノマイシンを 30 ng/mL の濃度で 20 時間処理した後、20 倍の対物レンズを用いて観察した。本条件下ではアポトーシスが進んでおり、アネキシン V-633、PI の双方で染色された。

データご提供:京都大学大学院 農学研究科 食品生物科学専攻 食品分子機能学分野 後藤 剛 准教授

価格表

製品名貯法製品番号容量オンライン
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Annexin V-633 Apoptosis Detection Kit 冷蔵 18146-44 100 tests e-Nacalai.jpg
Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 冷蔵 15342-54 100 tests e-Nacalai.jpg

*1 test は、細胞数 1×106 cells/mL を用いたアッセイに相当します。

※記載の内容は、'18年11月現在の情報に基づいております。