製品情報

Biotium社 アポトーシス検出キットNucView™

アポトーシスに関与する活性化Caspase-3をリアルタイムで検出できるキットを2種類紹介します。

原理

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NucView™ Caspase-3 Substrateは、蛍光DNA dyeとCaspase-3特異的基質DEVDから構成されています。本製品は、細胞膜透過性を有する非蛍光性の分子で、DNAへの親和性を有しません。しかし、アポトーシスによる活性化Caspase-3存在下においては、基質部位が分離されます。遊離したDNA dyeは、DNAとの親和性を生じ、複合体を形成した際は、鮮やかな緑色蛍光を発します。

NucView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for live cells 

特長

  • 生細胞で観察が可能
  • アポトーシスの進行を止めることなく観察が可能
  • 同時にCaspase-3活性の検出と細胞核の染色が可能
  • 操作はインキュベーションのみ
  • 細胞を固定化後、多重染色も可能

使用例

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スタウロスポリン誘導を行ったMDA-MB-231細胞を1μMのDEVD-NucView™ 488 Caspase-3と37℃で30分間インキュベーションした後、3.7%ホルムアルデヒドを用い固定化した。固定化した細胞は、透過処理を行った後、Sulforhodamine 101-phalloidin(Texas Red®-phalloidin(#00033))で染色した。アポトーシスを起こした細胞の核のDNAは、酵素的にNucView™から遊離したDNA色素により緑色に染色される。一方、細胞骨格は、F-アクチン結合性のPhalloidinにより赤色に染色された。

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1時間、2.5時間、5時間とさまざまなインキュベーション時間でスタウロスポリン処理した細胞をフローサイトメトリーにて検出。分析前に、誘導した細胞を本製品(10μM)と15分間インキュベーション。Caspase-3陽性細胞の割合を提示。
1時間:10%(図B)
2.5時間:80%(図C)
5時間:97%(図D)

キット構成

  • NucView™ 488 Caspase-3 substrate, 0.2mM in DMSO(250μl×2)
  • Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2mM in DMSO(20μl)

価格表

製品名貯法メーカー
製品番号
容量オンライン
カタログへ
NucView™ 488 Caspase-3 Assay Kit for live cells   冷蔵 30029 100-500 assays e-Nacalai.jpg
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NucView™ 488 Caspase-3 Enzyme Substrate 1mM in DMSO 冷蔵 10402 100μl e-Nacalai.jpg

Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 substrate and sulforhodamine101-annexin Ⅴ

特長

  • 複数の指標でアポトーシスを検出
    NucView™によるCaspase-3活性の検出、核の形態変化の検出とSulforhodamine101-annexin Ⅴによる細胞膜上のホスファチジルセリンの検出が可能
  • 生細胞で観察が可能
  • アポトーシスの進行を止めることなく観察が可能
  • 操作はインキュベーションのみ
  • 細胞を固定化後、多重染色も可能 

使用例

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アポトーシスが生じているJurkat細胞をsulforhodamine 101-annexin Ⅴ(Texas Red®-annexin Ⅴ)とNucView™ 488 Caspase-3で染色。annexin Ⅴは細胞膜から露出しているホスファチジルセリンを赤色に染色し、NucView™ 488 Caspase-3は核を緑色に染色した。アポトーシスのステージの異なる細胞がそれぞれ検出されているデータを提示する(左右のデータ)。

キット構成

  • NucView™ 488 Caspase-3 substrate, 0.2mM in DMSO(250μl)
  • Sulforhodamine 101-annexin Ⅴ, 50μg/ml in TE buffer containing 0.1% BSA and 0.1% NaN3, pH7.5(250μl)
  • Annexin Ⅴ binding buffer(10ml)
  • Caspase-3 inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2mM in DMSO(20μl)

価格表

製品名貯法メーカー
製品番号
容量オンライン
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Dual Apoptosis Assay with NucView™ 488 Caspase-3 substrate and sulforhodamine 101-annexin Ⅴ  冷蔵 30030 50-250 assays e-Nacalai.jpg
NucView™ 488 Caspase-3 Enzyme Substrate 1mM in DMSO 冷蔵 10402 100μl e-Nacalai.jpg

※記載の内容は、'14年3月現在の情報に基づいております。