製品情報

生細胞数測定試薬Cell Count Reagent SF

CellWell.jpg

本製品は、細胞増殖または化学物質の細胞毒性試験において、生細胞数を測定する試薬です。高水溶性ホルマザンを生成するテトラゾリウム塩 WST-8(特許第 2757348 号)を発色基質として使用することで、従来品より高感度測定が可能になりました。生成したホルマザンの吸光度を直接測定することにより、容易に生細胞数を測定できます。


特長

  • ラジオアイソトープ不要
  • 1 ボトル溶液タイプで、試薬調製不要
  • ホルマザンの溶解操作不要
  • 他の水溶性テトラゾリウム塩(XTT、MTS)より高感度

原理

BL-57_genri.png

プロトコール比較

protokoruhikaku.png

吸収スペクトル

WST-8 ホルマザンの吸収スペクトル

p2-WST-8.png

相関グラフ

[3H]-チミジン取り込みとの相関グラフ

p2-soukangurafu.png

使用方法

細胞増殖アッセイ

  1. 対数増殖期にある細胞を目的の細胞数になるように計数し、96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 µL ずつまく*1
  2. 炭酸ガスインキュベーター内で前培養する。
  3. 本製品を各ウェルに 10 μL ずつ添加する*2
  4. 炭酸ガスインキュベーター内で 1 ~ 4 時間呈色反応を行う*3
  5. マイクロプレートリーダーを用い、450 nm(参照波長 600 nm 以上)の吸光度を測定する*4
*1 フェノールレッドを含む培地もご使用になれます。
*2 必要に応じて試薬溶液は 0.22 µm メンブレンフィルターでろ過滅菌してお使いください。
*3 細胞の種類および数により発色感度が異なりますので、十分に検討の上お使いください。
また呈色後、以下のいずれかの方法で反応を停止することができます。
① マイクロプレートを 4℃ に冷却する。
② 0.1 M HCl を 10 µL 添加する。
③ 1 w/v% SDS を 10 µL 添加する。
反応停止後 24 時間以内に測定してください。
*4 生成するホルマザン色素の極大吸収波長は 460 nm 付近にありますので、高感度に測定するためには 430 ~ 490 nm の波長フィルターをご使用ください。 p3-saibouzousyoku-.png
使用培地
HeLa DMEM(10% ウシ胎児血清含有)
HL-60 RPMI1640(10% ウシ胎児血清含有)
呈色反応
HeLa 37℃、5% CO2、1 時間(■)、2 時間(▲)
HL-60 37℃、5% CO2、1 時間(■)、3 時間(●)
測定波長
450 nm(参照波長 650 nm)

細胞毒性試験

  1. 対数増殖期にある細胞を 5,000 cell/well の濃度になるよう計数し、96 穴マイクロプレートの各ウェルに 100 µL ずつまく。
  2. 炭酸ガスインキュベーター内で 24 時間前培養する。
  3. 目的の濃度に調製した薬剤を各ウェルに 10 µL ずつ添加する。
  4. 炭酸ガスインキュベーター内で 48 時間培養する。
  5. 本製品を各ウェルに 10 µL ずつ添加する。
  6. 炭酸ガスインキュベーター内で 1 ~ 4 時間呈色反応を行う。
  7. マイクロプレートリーダーを用い、450 nm(参照波長 600 nm 以上)の吸光度を測定する。
p3-saiboudokusei-.png
使用細胞 HeLa
使用培地 DMEM(10% ウシ胎児血清含有)
使用薬剤 Mitomycin C(MMC)
Sodium Dodecylsulfate(SDS)
薬剤処理 37℃、5% CO2、48 時間
呈色反応 37℃、5% CO2、2 時間
測定波長 450 nm(参照波長 650 nm)

参考文献

  • Ishiyama, M.; Miyazono, Y.; Sasamoto, K.; Ohkura, Y.; Ueno, K. Talanta. 1997, 44, p. 1299-1305.
  • Tominaga, H.; Ishiyama, M.; Ohseto, F.; Sasamoto, K.; Hamamoto, T.; Suzuki, K. and Watanabe, M. Anal. Commun. 1999, 36(2), p. 47.

安定性

  • 開封後頻繁に使用する場合は、遮光して 4℃ で保存し、なるべく早くお使いください。
  • 長期保存する場合は、遮光して -20℃ で保存してください。
  • 解凍は、室温に放置するか 37℃ 以下の温水で行ってください。
  • 凍結-融解操作はなるべく行わないでください。

包装単位

  • #07553-15:500 tests 用(試薬溶液 5 mL 1 本入り)
  • #07553-44:2,500 tests 用(試薬溶液 5 mL 5 本入り)

試薬溶液は、WST-8*、1-Methoxy PMS の混合溶液です。 1 本で 500 テスト(96 穴マイクロプレート 5 枚分)ご使用になれます。
* 株式会社同仁化学研究所より WST-8 の許可を得ています。(特許第 2757348 号)

価格表

製品名規格貯法製品番号容量

オンライン

カタログへ

生細胞数測定試薬 SF SP 冷蔵 07553-15 500 tests e-Nacalai.jpg

07553-44

2500 tests e-Nacalai.jpg
※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。