λ/HindⅢ（10 ng/500 μL）を 0.1 mol/L 酢酸ナトリウム存在下にて 1 mL のエタノールを加え、各条件で沈殿させた DNA のアガロース電気泳動を行った。

①1kbp DNA Ladder One（#08232）
②λ/HindⅢ（Control）
③λ/HindⅢ + 本製品 3 μL（直ちに遠心）
④λ/HindⅢ -20℃、60 分
⑤λ/HindⅢ -80℃、60 分
⑥λ/HindⅢ + A 社製品 3 μL（直ちに遠心）
⑦λ/HindⅢ + B 社製品 5 μL（直ちに遠心）*
⑧λ/HindⅢ + Glycogen Soln. （#17110） 3 μL（直ちに遠心）
*B 社製品は、添付文書に従って 0.3 mol/L 酢酸ナトリウム存在下でエタノール沈殿を実施した。

以上の結果より、他社製品と同様に低温保存をしなくても微量 DNA が十分に回収できることが示されました。

本製品が PCR へ与える影響を調べるために、あえて PCR 反応液へ加え、1,000 bp の DNA 領域を各社ポリメラーゼにより増幅した。反応は 25 μL（15 ng Template DNA、0.2 μM each Primer、0.2 mM dNTPs、ポリメラーゼおよび緩衝液は各添付文書に従った）で 94℃-0.5 分、55℃-0.5 分、72℃-1 分を 25 サイクル行った。

本製品　①0 μL　　②0.2 μL　　③0.5 μL　　④1 μL　　⑤3 μL　　⑥5 μL

以上の結果より、本製品は、PCR に影響を及ぼさないことが示されました。

Blend Taq^®、KOD Dash^®、KOD FX^® は東洋紡株式会社、TaKaRa Ex Taq^® は宝ホールディングス株式会社の登録商標です。

本製品および A 社製品について各原液、50 倍希釈溶液、100 倍希釈溶液の吸光度を測定しました。実験には 0.2 mL の原液または希釈液を供し、石英製ミクロセル（光路長 10 mm、光路幅 1 mm）を用いて 25℃ における吸光度を測定しました。またサンプルの希釈には超純水を採用しました。

A₂₆₀

	原液	50 倍希釈	100 倍希釈
本製品	0.342	0.012	0.007
A 社製品	0.674	0.015	0.007

A₂₈₀

	原液	50 倍希釈	100 倍希釈
本製品	0.283	0.010	0.005
A 社製品	0.568	0.011	0.005

細胞数の異なる HL-60 細胞から Sepasol^®-RNA I Super G を用いて Total RNA を抽出しました。0.125 × 10⁶ cells の HL-60 細胞においては、本製品を併用したサンプルも用意しました。抽出した Total RNA は DNase 処理後、RT-qPCR を行いました。なお、一連の操作において、各細胞数サンプルは、溶解液量などすべて同条件で処理しました。
Sepasol^® はナカライテスク株式会社の登録商標です。

RT-qPCR の結果

＜実験条件＞

プライマー	【Gene target】β-Actin 【Forward primer】5'-AAGAGAGGCATCCTCACCCT-3' 【Reverse primer】5'-TACATGGCTGGGGTGTTGAA-3' 【PCR product】218 bp
PCR 酵素（逆転写酵素）	One Step TB Green® PrimeScript RT-PCR Kit II（Perfect Real Time）（タカラバイオ#RR086A）
PCR 条件	①Hold（逆転写）　42℃（5分） → 95℃（10秒）, 1 cycle ②2 Step PCR　95℃（5秒） → 60℃（30秒）, 40 cycles ③Dissociation　95℃（15秒） → 60℃（30秒） → 95℃（15秒）, 1 cycle
リアルタイム PCR 装置	Thermal Cycler Dice® Real Time System III（タカラバイオ）

RNA を抽出する際、細胞数が少ないと、RNA 収量が減少し、サンプル間のばらつきも大きいですが、アルコール沈殿時に共沈剤を併用することで、収量を上げ、ばらつきを減らせることが示されました。
Thermal Cycler Dice^®、TB Green^®、PrimeScript はタカラバイオ株式会社の登録商標です。

大腸菌からプラスミド DNA を抽出し、その抽出したプラスミド DNA に対して、本製品または A 社製品を用いたエタノール沈殿を行った。また、共沈剤を用いない一般的なエタノール沈殿を行い、これらの精製プラスミド DNA をアガロースゲル電気泳動によって比較した。

分析手順

試薬・キット

• 本製品
• A 社製品
• エタノール（#14713）
• NucleoSpin^® Plamid QuickPure（MACHEREY-NAGEL #740615.250）

NucleoSpin^® は Macherey, Nagel GmbH & Co. KG Handelsgesellschaft の登録商標です。

結果（アガロース電気泳動）

①1kbp DNA Ladder One（#08232）
②A 社製品
③本製品
④エタノール沈殿（共沈剤なし）
⑤粗精製プラスミド DNA

上図より、本製品または A 社製品を用いることで、従来のエタノール沈殿に比べ高純度、高収率でプラスミド DNA を精製することができた。また、本製品による精製 DNA と A 社製品による精製 DNA で、アガロース電気泳動の結果に差は見られなかった。

データご提供：
（公財）京都高度技術研究所（ASTEM） 産学連携事業部連携支援グループ（京都バイオ計測センター）　奥村 健太 様
（地独）京都市産業技術研究所　バイオ系チーム　泊 直宏 研究員