ナカライテスク株式会社

グリコーゲン溶液

  • 試料抽出
  • 電気泳動

核酸を精製、濃縮する一番簡単な方法は、高分子コロイドである DNA をアルコールと塩で凝集させて沈殿を得る(コロイド塩析)方法です。しかし、微量な DNA や RNA をアルコール沈殿にて回収する場合、回収率が低下することが知られており、この回収率の低下を防ぐ目的で、アルコール沈殿を行う試料にグリコーゲンや tRNA を添加します。本製品は、アルコール沈殿を行う際に共沈剤として添加し、核酸の回収率を上げるために使用するものです。

特長
  • Ready to use
  • 収率アップ
  • 冷却ステップ不要
  • 逆転写酵素の阻害なし
  • ヌクレアーゼ試験済
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使用方法

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製品使用例

使用例 1

微量核酸の回収

10 ng/100 µL に調製した λ/Hind Ⅲ溶液を、0.3 mol/L 酢酸ナトリウム存在下にてそれぞれエタノール沈殿を行ない、回収 DNA をアガロースゲル電気泳動により確認しました。 グリコーゲンを添加することで微量 DNA を効率よく回収できることを確認しました。またグリコーゲン添加後直ちに遠心操作を行っても、90% 以上の DNA を回収できることを確認しました。

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レーン 1 :Control

レーン 2 :グリコーゲン未添加、直ちに遠心

レーン 3 :グリコーゲン添加(1 μL)、直ちに遠心

レーン 4 :グリコーゲン添加(1 μL)、室温、1 時間

レーン 5 :グリコーゲン添加(1 μL)、-30℃、1 時間

レーン 6 :A 社 共沈剤添加(1 μL)、直ちに遠心

逆転写酵素への影響

10,000 cells の浮遊培養細胞 HL-60 から Sepasol®-RNAⅠSuper を用いて RNA の抽出を行い、グリコーゲン添加イソプロパノール沈殿で RNA を回収しました。回収した RNA を DNase 処理し、次いで逆転写酵素 ReverTra Ace®(TOYOBO)を使って cDNA としました。さらに同一チューブで DNA ポリメラーゼ KOD Dash®(TOYOBO)を使い β-Actin(645 bp)の増幅を行いました。 共沈剤としてグリコーゲン溶液を用いて回収した RNA は、逆転写酵素に影響を与えず RT-PCR への適応が可能であることを確認しました。 ReverTra Ace、KOD Dash は東洋紡株式会社の登録商標です。

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レーン 1 :100 bp ラダーマーカー

レーン 2 :グリコーゲン未使用

レーン 3 :グリコーゲン 0.5 μL 使用

レーン 4 :グリコーゲン 1 μL 使用

レーン 5 :グリコーゲン 3 μL 使用

レーン 6 :グリコーゲン 5 μL 使用

使用例2

Sepasol® によるTotal RNA の抽出時にグリコーゲンを添加することで、細胞から RNA を効率良く回収できることが確認されました。以下にそのプロトコールを紹介します。

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関連資料

価格表

製品名 貯法 製品番号 容量 オンラインカタログへ
Glycogen Solution(20mg/ml) from Oyster, Nuclease tested 冷凍 17110-11 1 mL e-Nacalai.jpg

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