翻訳効率を高める新たなキャッピング技術TriLink 社 CleanCap® Technology
mRNA を用いた医薬品開発の研究が活発になってきており、新型コロナウイルスワクチンをはじめ、がん免疫治療、ゲノム編集、再生医療などへの応用も期待されています。効果的な mRNA を合成するうえで重要なのが 5' 末端側に付加するキャップです。TriLink 社が開発した独自のキャッピング試薬 CleanCap® は、ワンポットで Cap1 構造を付加することができ、さらにキャッピング効率が高いため、従来と比べて翻訳効率の高い mRNA を合成することが可能です。
特長
- 自然免疫応答低減（Cap 1 構造）
- キャッピング効率が高い（90 ～ 99%）
性能評価
自然免疫応答低減（CleanCap® と ARCA の比較）
mRNA 導入キットを用いて mRNA 1 µg を導入し、24 時間後または 72 時間後に解析を行いました。
| CleanCap® EGFP mRNA | ARCA EGFP mRNA | |
|---|---|---|
| CHO 細胞 72 時間後 |
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| 包皮線維芽細胞 24 時間後 |
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| iPS 由来心筋細胞 24 時間後 |
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CleanCap® でキャッピングした mRNA は、ARCA と比べて自然免疫応答が低減されているため、EGFP の発現量が多くなっています。
キャッピング効率
キャッピング効率を比較した結果、CleanCap®（左）は ARCA（右）と比べてキャッピング効率が高いことが示されています。
| CleanCap® | ARCA | |
|---|---|---|
| キャッピング効率 | 90 ～ 99% | 60 ～ 80% |
| キャップ構造 | Cap 1 | Cap 0 |
翻訳効率の高い mRNA の合成が可能
CleanCap® 試薬
TriLink 社では Cap 1 構造を mRNA に付加できる CleanCap® 試薬を販売しています。ARCA と同じ手法でキャッピングすることが可能で、さらにキャッピング効率も ARCA と比べて優れています。
特長
- Cap1 構造を有しているため、自然免疫応答が低減
- 塩基の種類を変えることで、3 種類のテンプレートに対応
CleanCap® の構造
ラインアップ
CleanCap® AG
通常の mRNA の合成を検討しているお客さまにお薦めです。キャッピング効率（90 ～ 99%）が高く、免疫応答も抑えることができます。
T7 プロモーター配列直後の転写開始配列が AGG である必要があります。
CleanCap® GG
今まで ARCA を使用しており、テンプレートの変更を予定していないお客さまにお薦めです。キャッピング効率は ARCA と同等ですが、Cap1 が付加されるため、免疫応答を抑えることができます。
T7 プロモーター配列直後の転写開始配列が GGG である必要があります。
CleanCap® AU
自己増幅 mRNA（self-amplifying RNA）の合成を検討しているお客さまにお薦めです。アルファウイルス発現ベクターに由来する自己増幅 RNA は、AU 配列で転写が開始することが知られており、この AU 配列は複製において重要とされています*。
T7 プロモーター配列直後の転写開始配列が AU である必要があります。
アルファウイルスの転写開始部分
* Reference:
Kulasegaran-Shylini, R. et al.
Structural and Functional Elements of the Promoter Encoded by the 5' Untranslated Region of the Venezuelan Equine Encephalitis Virus Genome.
J. Virol. 2009, 83(17), p. 8327–8339.
価格表
| 製品名 | メーカー 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ | ||
|---|---|---|---|---|---|
| CleanCap® Reagent AG | N-7113-1 | 1 µmol |  |
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| N-7113-5 | 5 µmol | |
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| N-7113-10 | 10 µmol | |
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| CleanCap® Reagent (3' OMe) AG | N-7413-1 | 1 µmol | |
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| N-7413-5 | 5 µmol | |
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| N-7413-10 | 10 µmol | |
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| CleanCap® Reagent GG | N-7133-1 | 1 µmol | |
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| N-7133-5 | 5 µmol | |
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| N-7133-10 | 10 µmol | |
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| CleanCap® Reagent (3' OMe) GG | N-7433-1 | 1 µmol | |
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| N-7433-5 | 5 µmol | |
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| N-7433-10 | 10 µmol | |
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| CleanCap® Reagent AU | N-7114-1 | 1 µmol | |
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| N-7114-5 | 5 µmol | |
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| N-7114-10 | 10 µmol | |
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キャッピングや修飾塩基への置換が可能
mRNA 合成受託サービス
mRNA 合成受託サービスの詳細はこちら
CleanCap® と改変技術の併用で免疫応答低減
修飾・改変 mRNA
合成 mRNA を自然免疫応答から回避するために、キャップ構造を付加する以外に、RNA の構成成分の一つであるウリジンの含有量を最小限に減らすこと、除去できないウリジンを修飾ウリジンに置換することが効果的であると報告されています。 TriLink 社では、CleanCap® によるキャッピングに加え、ウリジンの含有量を削減し、かつ修飾ウリジンで置換を施した免疫応答誘導性の低い mRNA を販売しています。
特長
- 修飾・改変による免疫応答低減
性能評価
ウリジン含有量削減と修飾ウリジンの併用効果
FLuc をコードする mRNA を THP-1 細胞に導入し発現させた結果、ウリジン含有量を削減し（U depleted FLuc）、かつ 5-メトキシウリジン（5moU）で置換した mRNA が最も自然免疫応答を回避していることが示されています。
価格表
| 製品名 | メーカー 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
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|---|---|---|---|---|---|
| CleanCap® EGFP mRNA (5moU) | L-7201-100 | 100 µg |  | ||
| L-7201-1000 | 1 mg | | |||
| L-7201-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® FLuc mRNA (5moU) | L-7202-100 | 100 µg | | ||
| L-7202-1000 | 1 mg | | |||
| L-7202-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® mCherry mRNA (5moU) | L-7203-100 | 100 µg | | ||
| L-7203-1000 | 1 mg | | |||
| L-7203-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® Renilla Luc mRNA (5moU) | L-7204-100 | 100 µg | | ||
| L-7204-1000 | 1 mg | | |||
| L-7204-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® Cas9 mRNA (5moU) | L-7206-20 | 20 µg | | ||
| L-7206-100 | 100ug | | |||
| L-7206-1000 | 1 mg | | |||
| L-7206-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® Cas9 Nickase mRNA (5moU) | L-7207-20 | 20 µg | | ||
| L-7207-100 | 100 µg | | |||
| L-7207-1000 | 1 mg | | |||
| L-7207-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® beta gal mRNA (5moU) | L-7208-100 | 100 µg | | ||
| L-7208-1000 | 1 mg | | |||
| L-7208-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® EPO mRNA (5moU) | L-7209-20 | 20 µg | | ||
| L-7209-100 | 100 µg | | |||
| L-7209-1000 | 1 mg | | |||
| L-7209-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® OVA mRNA (5moU) | L-7210-100 | 100 µg | | ||
| L-7210-1000 | 1 mg | | |||
| L-7210-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® Cre mRNA (5moU) | L-7211-100 | 100 µg | | ||
| L-7211-1000 | 1 mg | | |||
| L-7211-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® EGFP mRNA | L-7601-100 | 100 µg | | ||
| L-7601-1000 | 1 mg | | |||
| L-7601-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® FLuc mRNA | L-7602-100 | 100 µg | | ||
| L-7602-1000 | 1 mg | | |||
| L-7602-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® Cas9 mRNA | L-7606-20 | 20 µg | | ||
| L-7606-100 | 100 µg | | |||
| L-7606-1000 | 1 mg | | |||
| L-7606-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® beta gal mRNA | L-7608-100 | 100 µg | | ||
| L-7608-1000 | 1 mg | | |||
| L-7608-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® Ova mRNA | L-7610-20 | 20 µg | | ||
| L-7610-100 | 100 µg | | |||
| L-7610-1000 | 1 mg | | |||
| L-7610-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® Cyanine 5 EGFP mRNA (5moU) | L-7701-100 | 100 µg | | ||
| L-7701-1000 | 1 mg | | |||
| L-7701-5 | 5 X 1 mg | | |||
| CleanCap® Cyanine 5 FLuc mRNA (5moU) | L-7702-100 | 100 µg | | ||
| L-7702-1000 | 1 mg | | |||
| L-7702-5 | 5 X 1 mg | | |||
製品名に (5moU) が含まれる製品は、ウリジン含有量を削減し、かつ修飾ウリジンで置換した製品です。
CleanCap® は TriLink BioTechnologies, LLC の登録商標です。
※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。
