製品情報

細胞溶解液RIPA Buffer

RIPA Buffer は界面活性剤を含んだタンパク質抽出用の緩衝液で、タンパク質の可溶化・抽出に使用されます。抽出されたタンパク質は、ウェスタンブロッティングや免疫沈降などのアプリケーションに使用できます。

ラインアップ

弊社では、RIPA の基本組成で構成される 1 × 調製済み（ready to use タイプ）の製品と、プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有し、免疫沈降時に悪影響を与える可能性のある SDS を別添付した 10 倍濃縮タイプの 2 製品を販売しています。

製品名RIPA BufferRIPA Buffer（10x）
製品番号16488-3408714-04
濃縮1 ×（ready to use）10 ×
プロテアーゼ
阻害剤カクテル		不含含有
SDS含有不含（1% SDS 溶液を添付）
保存冷蔵冷凍
組成
  • 50 mmol/L Tris-HCl Buffer（pH 7.6）
  • 150 mmol/L NaCl
  • 1% Nonidet P40 Substitute
  • 0.5% Sodium Deoxycholate
  • 0.1% SDS
【1 × 溶液調製後（SDS 添加）】
  • 50 mmol/L Tris-HCl Buffer（pH 7.6）
  • 150 mmol/L NaCl
  • 1% Nonidet P40 Substitute
  • 0.5% Sodium Deoxycholate
  • Protease Inhibitor Cocktail（1 ×）
  • （0.1% SDS）
製品外観1648834.jpg 0871404.jpg
容量 / セット内容100 mL
  • RIPA Buffer（10x）: 2 mL × 5 本
  • SDS Solution（1% SDS）: 2 mL × 5 本

Nonidet はシェル ブランズ インターナショナル アクチェンゲゼルシャフトの登録商標です。

RIPA Buffer（#16488-34）

RIPA Buffer（#16488-34）は調製済みの溶液で、開封後そのまま使用できます。研究目的によっては、プロテアーゼ阻害剤やホスファターゼ阻害剤を添加して使用することも可能です。

使用例

RIPA Buffer 抽出タンパク質の電気泳動

RIPA Buffer（#16488-34）に次の阻害剤を 1% または 2% の濃度で添加、HL-60 細胞からタンパク質を抽出し、SDS-PAGE を行いました。

  • プロテアーゼ阻害剤カクテル（一般用）（#04080）
  • プロテアーゼ阻害剤カクテル（動物細胞抽出物用）（#25955）
  • ホスファターゼ阻害剤カクテル（#07574-61）

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サンプル：
① タンパク質マーカー(10倍濃縮)（#29458-24）を 1 × に調製
② ～ ⑬ HL-60 細胞から抽出したタンパク質

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*#04080 と#25955 の双方が混合されているわけではありません。

泳動ゲル：
Extra PAGE One Precast Gel, 5-20%, 13wells（#13063-74）

染色：
CBB Stain One（#04543）

RIPA Buffer 抽出タンパク質のウェスタンブロッティング

Lane ④ と ⑫ について、リン酸化タンパク質の検出を行いました。

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サンプル：
④ ホスファターゼ阻害剤（#07574-61）を 1% で添加した場合
⑫ ホスファターゼ阻害剤無添加の場合

電気泳動：
Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 17wells（#13080-44）　400 V　10 分

転写：
Bullet Semi-dry Transfer One（#15353-01）　25 V　10 分

ブロッキング：
Blocking One-P（#05999-84）　20 分

抗体：
p-Tyr 抗体 (PY20) HRP（Santa Cruz #sc-508 HRP） 2,000 倍希釈　60 分

検出：
Chemi-Lumi One Super（#02230）

RIPA Buffer（#16488-34）にホスファターゼ阻害剤カクテル（#07574-61）を添加することにより、HL-60 細胞由来のリン酸化タンパク質は、ホスファターゼによる影響を回避することができました。

価格表

製品名貯法製品番号容量

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RIPA Buffer

 冷蔵 16488-34 100 mL e-Nacalai.jpg

RIPA Buffer（10x）（#08714-04）

SDS Solution 添加の有無により、分析の効率を上げることができます。

使用例 1

SDS 添加による抽出時の効果と免疫沈降時の影響

抽出

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抽出条件：
冷 PBS で洗浄した組織切片 100 mg に対して、RIPA Buffer 300 µL を氷上で 30 分処理

染色：
CBB Stain One（#04543）

左図：
マウスの胃から各 RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液
① SDS（-）RIPA
② SDS（+）RIPA
③ A 社 RIPA（SDS 入り）

右図：
① Pre-stained Protein Markers（Broad Range）（#02525-35）
② タンパク質マーカー(10倍濃縮)（#29458-24）
各組織から SDS（+）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液
③ Mouse Liver
④ Mouse Kidney
⑤ Mouse Stomach
⑥ Mouse Brain
⑦ Mouse Heart

 

免疫沈降

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抽出条件：
Jurkat Cell 1.0 × 107 個に対して、RIPA Buffer 1 mL を氷上で 15 分処理
① SDS（-）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液
② SDS（+）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液
③ タンパク質マーカー(10倍濃縮)（#29458-24）
④ SDS（-）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液から免疫沈降した溶液
⑤ SDS（+）RIPA を用いてタンパク質抽出した溶液から免疫沈降した溶液
⑥ アガロースコントロール

一次抗体：
β-Actin 抗体(C4)（Santa Cruz #sc-47778）

二次抗体：
goat anti-mouse IgG-HRP（Santa Cruz #sc-2005）

左図染色：
Sil-Best Stain One（#06865-81）

右図検出：Chemi-Lumi One L（#07880）

 

抽出時の組織溶解性は、SDS（+）の方が高い結果が得られました。一方、免疫沈降においては、SDS（-）の方が多くの β-Actin を検出しました。

使用例 2

転写因子（SREBP-1、ChREBP）のウェスタンブロッティングによる検出

データご提供：近畿大学農学部 応用生命化学科 応用細胞生物学研究室　森山 達哉 准教授

 

CBB 染色

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① SDS（+）
② SDS（-）
③ B 社（SDS 入り）

染色：
CBB Stain One（#04543）

 

ウェスタンブロッティング

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① SDS（+）
② SDS（-）
③ B 社（SDS入り）

ブロッキング：
Blocking One（#03953）

検出：
Chemi-Lumi One L（#07880）

 

細胞質や核などに存在している抽出しにくいタンパク質が、効率よく抽出できました。

価格表

製品名貯法製品番号容量

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RIPA Buffer(10x)

 冷凍 08714-04 1 set e-Nacalai.jpg

※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。