ウェスタンブロッティングでのブロッキング（ブロッキング時間 20 分）

HeLa 細胞ライセートからのリン酸化タンパク質の検出

わずか 20 分のブロッキング処理で、低バックグラウンド、高感度検出が可能です。

サンプル：HeLa 細胞 1.0×10⁷ 個 ＋ 1 × に調製した RIPA バッファー（10 倍濃縮）（#08714-04）（1 mL）　①5 µL　②10 µL
検出に用いた抗体：
一次抗体　p-Tyr（PY20）（Santa Cruz #sc-508） 2,000 倍希釈
二次抗体　goat anti-mouse IgG-HRP（Santa Cruz #sc-2005） 10,000倍希釈
転写膜の染色：CBB Stain One（#04543）
化学発光検出：Chemi-Lumi One L（#07880）

ブロッキング溶液の標準的な調製法と使用方法

96 穴マイクロプレートのブロッキング溶液（マイクロプレート 1 枚分）

清潔な 50 mLビーカーにイオン交換水 32 mL、本製品 8 mLを添加して、十分に混和してください。これ以外のスケールで調製する場合には、イオン交換水 4 容量と本製品 1 容量の割合で混和してください。
調製したブロッキング溶液を、抗体固定済みのマイクロプレートに 1 ウェルあたり 350 µL 分注します。
分注後室温で 40 分静置します。静置後、マイクロプレートを逆さまにしてブロッキング溶液を除去し、1 ウェルあたり 350 µL の TBS を分注し、ブロッキング溶液を洗浄します。同様の操作を 3 回繰り返し、ブロッキング溶液を完全に除去してから、その後の抗原抗体反応に使用してください。（リン酸化検出の場合、操作中のホスファターゼの混入によるサンプルの脱リン酸化を防止する目的でホスファターゼ阻害剤（例：ホスファターゼ阻害剤カクテル #07574-61）を添加することを推奨します。）

酵素標識抗体の希釈（マイクロプレート 1 枚分）

清潔な 20 mL ビーカーにポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（Tween 20）などの界面活性剤を 0.1% 程度含む TBS 19 mL、本製品 1 mLを添加して十分に混和してください。これ以外のスケールで溶液を調製する場合には、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（Tween 20）などの界面活性剤を 0.1% 程度含む TBS 19 容量と本製品 1 容量の割合で混和してください。
20 倍希釈したブロッキング溶液に所定量の酵素標識抗体を添加して、泡立たない程度に十分混和し、直ちに測定に使用します。なお、希釈後の酵素標識抗体は希釈液の種類に限らず酵素活性が経時的に低下し、ELISA 測定の感度の低下につながる恐れがありますので、なるべく早く使用してください。（リン酸化検出の場合、操作中のホスファターゼの混入によるサンプルの脱リン酸化を防止する目的でホスファターゼ阻害剤を添加することを推奨します。）

イムノブロッティング膜のブロッキング

本製品をそのまま使用してください。
10 cm × 10 cm 程度の膜をブロッキングする場合は、本製品 50 mLを清潔な樹脂製のトレーに入れ、膜を浸して 20 分程度振とうしてください。