■in vitro におけるDUBsの阻害

HEK293細胞の溶解液（PR-619またはDMSO含有）へAgarose-TUBE1^*1を加えてユビキチン化タンパク質をプルダウンした。Agarose-TUBE1^*1からユビキチン化タンパク質を溶出し、ウェスタンブロッティングを行った。検出にはBiotin-TUBE1^*1とStreptavidin-HRPを用いた。図中の重量はプルダウンに使用したタンパク質量を示している。
Input：遠心分離前のサンプル
Mock：TUBE1が結合していないAgaroseでプルダウンしたサンプル
Unbound：遠心分離後のサンプル
細胞溶解液へPR-619を添加することで、溶解後の脱ユビキチン化が防がれていた。

^*1 TUBEはTandem Ubiquitin Binding Entityのことで、ユビキチンに対する特異性と親和性が抗体よりも高い人工タンパク質です。