タンパク質により還元された銅がビシンコニン酸ナトリウムと錯体を形成、この錯体の吸収極大波長（562 nm）の吸光度を測定することにより、タンパク質を定量します。

反応生成物の吸光スペクトル

※本製品には検量線用標準液は含まれていません。
   アルブミン (ウシ血清) 溶液 (2mg/ml)（#00653-31）などの検量線用タンパク質標準液をご準備ください。

詳細は取扱説明書をご参照ください。

検量線用標準液の調製

本製品には検量線用標準液は含まれていません。アルブミン (ウシ血清) 溶液 (2mg/ml)（#00653-31）を適宜希釈してご使用ください。測定サンプルと同一の溶媒で希釈することをお薦めします。

操作

*540 ～ 590 nm で測定は可能です。ただし、吸収極大波長が 562 nm にあるため、できるだけ近い波長での測定をお薦めします。

参考：測定波長 562 nm、540 nm、590 nm の BSA 検量線

タンパク質濃度の算出

検量線用標準液から得られた吸光度（試薬ブランクの吸光度を差し引いた値）を用いて検量線を作成します（横軸：タンパク質濃度　縦軸：吸光度）。この検量線に披検液から得られた吸光度（試薬ブランクの吸光度を差し引いた値）を当てはめてタンパク質濃度を算出します。

本製品を用いて、BSA、γ-Globulin、Transferrin 濃度を測定しました。BCA 法ではタンパク質の種類による反応差は CBB 法（Bradford 法）と比較して小さくなります。また、低濃度から高濃度まで広範囲にわたり直線近似が保たれるため、幅広い範囲で測定が可能です。

BSA 濃度を標準法（37℃ 30 分反応）、室温法（室温 120 分反応）および高感度法（60℃ 30 分反応）で測定しました。標準法と室温法ではほぼ同等の結果となりました。また、標準法と比較し、高感度法ではより微量のタンパク質が測定可能でした。

標準法と室温法の比較

標準法と高感度法の比較

BSA（左：0 mg/mL、右：1.0 mg/mL）にそれぞれの夾雑物を添加し、反応させました。BCA 法の原理より、還元剤などの夾雑物はサンプルの測定に影響を与えることがあります。夾雑物が含まれる場合は、BCA 還元剤アダプト試薬を使用するか、共存可能物質表を参考に測定可能な濃度までサンプルを希釈し測定してください。

各社推奨標準法（マイクロプレート）にて反応。
それぞれの混合比（サンプル : BCA 反応溶液）：本製品（25 : 200）、A 社製品（25 : 200）