充実したラインアップInvivoGen 社 細胞質内 DNA センサー STING 研究用試薬
InvivoGen 社は自然免疫研究用試薬で高い評価を受けているメーカーです。細胞質内 DNA センサーとして知られている STING 研究用の製品を紹介します。
STING は、dsDNA の刺激により TBK1 と IRF3 を活性化しⅠ型インターフェロンの発現を誘導するアダプタータンパク質です。一方で STING が環状ジヌクレオチド(CDN)と直接結合することで、Ⅰ型インターフェロンを誘導することも知られています。
製品カテゴリー
STING レポーター細胞
STING 遺伝子をノックアウトした細胞などを取り揃えています。野生型と比較することで STING 経路の活性化を確認できます。
変異型 STING 発現ベクター
ヒトまたはマウスの変異型 STING を発現するベクターを提供しています。
STING リガンド
STING を刺激してインターフェロンの発現を誘導するリガンドです。20 種類以上取り揃えています。
STING レポーター細胞
STING 遺伝子をノックアウトしたレポーター細胞を販売しています。この細胞は、IRF 誘導性プロモーターにより制御されているレポーター遺伝子である SEAP(分泌型アルカリホスファターゼ)もしくは Lucia(ルシフェラーゼ)が組み込まれています。分泌された SEAP、Lucia は、検出試薬である QUANTI-Blue もしくは QUANTI-Luc を用いて簡単に検出することができます。
実施例
THP1-Dual 細胞と THP1-Dual KO-STING 細胞のリガンドに対する応答
THP1-Dual 細胞と THP1-Dual KO-STING 細胞を 100 ng/mL poly(I:C)LMW/LyoVec、1 μg/mL VACV-70/LyoVec、3 μg/mL 2'3'-cGAMP、10 μg/mL c-di-AMP により刺激した。1 × 104 U/mL ヒト IFN-αと IFN-βはポジコンとして使用した。 IRF の活性化は Lucia(ルシフェラーゼ)検出試薬である QUANTI-Luc を用いてルミノメーターにより発光量を測定した。各リガンドの活性化は、IFN-βによる活性化を 100% とした場合の相対値として示されている。
B16-Blue ISG 細胞と B16-Blue ISG-KO-STING 細胞のリガンドに対する応答
両細胞を 30 μg/mL CDNs または 103 U/mL mIFN-βにより刺激し、24 時間インキュベーションした後、SEAP を QUANTI-Blue を用いて定量した。
RAW-Lucia ISG 細胞と RAW-Lucia ISG-KO-STING 細胞のリガンドに対する応答
両細胞を 30 μg/mL CDNs または 103 U/mL mIFN-βにより刺激し、24 時間インキュベーションした後、Lucia を QUANTI-Luc を用いて定量した。
価格表
THP1-Dual KO-STING Cells には、Blasticidin、Zeocin、Normocin、アッセイ用の基質(QUANTI-Blue および QUANTI-Luc)が含まれています。その他の製品は Zeocin、Normocin と QUANTI-Blue または QUANTI-Luc が含まれています。
本製品はお手元に到着次第、すぐに培養する必要があります。
由来:THP1 単球細胞(ヒト) レポーター:SEAP
製品名 | メーカー 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
---|---|---|---|
THP1-Blue ISG Cells | thp-isg | 3-7 X 106cells |
由来:THP1 単球細胞(ヒト) レポーター:SEAP/Lucia
製品名 | 毒劇物 | メーカー 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
---|---|---|---|---|
THP1-Dual KO-STING Cells | 劇 | thpd-kostg | 3-7 X 106cells |
由来:HEK293 細胞(ヒト) レポーター:SEAP
製品名 | メーカー 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
---|---|---|---|
HEK-Blue ISG Cells | hkb-isg-1 | 3-7 X 106cells | |
HEK-Blue ISG-KO-STING Cells | hkb-isgkostg | 3-7 X 106cells |
由来:B16 メラノーマ細胞(マウス) レポーター:SEAP
製品名 | メーカー 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
---|---|---|---|
B16-Blue ISG Cells | bb-ifnabg | 3-7 X 106cells | |
B16-Blue ISG-KO-STING Cells | bb-kostg | 3-7 X 106cells |
RAW 264.7 マクロファージ(マウス) レポーター:Lucia
製品名 | メーカー 製品番号 | 容量 | オンライン カタログへ |
---|---|---|---|
RAW-Lucia ISG Cells | rawl-isg | 3-7 X 106cells | |
RAW-Lucia ISG-KO-STING Cells | rawl-kostg | 3-7 X 106cells |
変異型 STING 発現ベクター
CDN の認識やシグナル伝達に影響を与えるいくつかの変異型 STING がヒトおよびマウスで報告されています。InvivoGen 社では、これら変異型 STING を発現ベクター(pUNO1)へ組み込んだ状態で販売しています。
製品情報
変異導入部位
赤字:変異アミノ酸
ヒト由来
製品名 | アミノ酸番号 | 参考文献 | ||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
71 | 155 | 162 | 200 | 230 | 232 | 293 | ||
hSTING | R | V | S | I | G | R | R | ― |
hSTING-H232 | R | V | S | I | G | H | R | 1,2 |
hSTING-A230 | R | V | S | I | A | R | R | 1 |
hSTING-HAQ | H | V | S | I | A | R | Q | 1,3 |
hSTING-A162 | R | V | A | I | G | R | R | 4,5 |
hSTING-M155 | R | M | S | I | G | R | R | 9 |
hSTING-MRP | R | V | S | I | G | R | ― | 6 |
hSTING-N200 | R | V | S | N | G | R | R | 7,8 |
マウス由来
製品名 | アミノ酸番号 | 参考文献 | |||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
70 | 161 | 199 | 229 | 231 | 292 | ||
mSTING | L | S | I | I | R | R | ― |
mSTING-Gt | L | S | N | I | R | R | 8 |
ベクターマップ
性能評価
変異型 STING の CDNs および DMXAA に対する応答
HEK-Blue ISG KO-STING 細胞に STING もしくは STING 変異体をトランスフェクションし、その細胞を、10 µg/mL 2’3’-cGAMP、3’3’-cGAMP、c-di-GMP もしくは DMXAA により刺激した。24 時間インキュベーション後、SEAP の量を QUANTI-Blue を用いて定量した。
参考文献
- Yi, G. et al. Single Nucleotide Polymorphisms of Human STING Can Affect Innate Immune Response to Cyclic Dinucleotides. PLoS One. 8(10), e77846 (2013).
- Diner, EJ. et al. The innate immune DNA sensor cGAS produces a noncanonical cyclic dinucleotide that activates human STING. Cell Rep. 3(5), 1355-1361 (2013).
- Jin, L. et al. Identification and characterization of a loss-of-function human MPYS variant. Genes Immun. 12(4), 263-269 (2011).
- Gao, P. et al. Structure-function analysis of STING activation by c[G(2',5')pA(3',5')p] and targeting by antiviral DMXAA. Cell. 154(4), 748-762 (2013).
- Conlon, J. et al. Mouse, but not human STING, binds and signals in response to the vascular disrupting agent 5,6-dimethylxanthenone-4-acetic acid. J Immunol. 190(10), 5216-5225 (2013).
- Chen, H. et al. An Alternative Splicing Isoform of MITA Antagonizes MITA-Mediated Induction of Type I IFNs. J Immunol. 192(3), 1162-1170 (2014).
- Yin, Q. et al. Cyclic di-GMP sensing via the innate immune signaling protein STING. Mol Cell. 46(6), 735-745 (2012).
- Sauer, JD. et al. The N-ethyl-N-nitrosourea-induced Goldenticket mouse mutant reveals an essential function of Sting in the in vivo interferon response to Listeria monocytogenes and cyclic dinucleotides. Infect Immun. 79(9), 688-694 (2011).
- Liu Y. et al. Activated STING in a vascular and pulmonary syndrome. N Engl J Med. 371(6), 507-18 (2014).
価格表
各製品には Blasticidin が含まれています。
*C 末端側に HA タグがついているベクターです。
STING リガンド
環状ヌクレオチド(CDN)と DMXAA などの Xanthenone 誘導体は、STING を活性化し、強力なⅠ型インターフェロン応答を誘導するため、自然免疫応答のアゴニストとして注目されています。新製品も拡充されましたので、製品ラインアップ全体を紹介します。
特長
- 2 種類のグレードを提供
- 保証項目も充実
グレード
通常グレードと前臨床用グレードの VacciGrade の 2 種類を提供しています。
- 通常グレード:純度 95% 以上、リガンド活性をレポーター細胞により評価
- VacciGrade:通常グレードの項目に加え、エンドトキシン(<0.005 EU/μg)、完全滅菌条件下での製造を保証
レポーター細胞を用いた活性評価の例
InvivoGen 社より販売のレポーター細胞 THP1-Dual cells を用いて、各リガンドの活性を評価しています。
価格表
※掲載内容は予告なく変更になる場合があります。