SDS-PAGE ゲルの染色

Protein MW Markers および GST-tag 融合タンパク質を CBB Stain One で染色した結果です。マーカーおよび GST-tag 融合タンパク質を 12% アクリルアミドゲル上で泳動後、ゲル上に存在する SDS を脱イオン水により除去し、CBB Stain One で染色（60 分）しました。染色後のゲルを精製水で脱色したところ、鮮明な泳動像が得られました。上記の結果から、本製品で簡便・迅速に CBB 染色が行えることが実証されています。

データご提供：東京医科歯科大学 難治疾患研究所 分子遺伝学分野 吉田 清嗣 准教授

実験条件

CBB Stain One は B 社に比して、バックグラウンドが低く、グラジエントゲルによる染色ムラがありませんでした。また染色（検出感度）・脱色に関しては A 社と同程度の性能を示しました。

電子レンジ使用法では、約 40 分で結果が確認できます。

• ここに記載の染色法は、ミニゲル（10 cm × 10 cm × 1 mm）の染色に使用する液量です。フルサイズゲルの染色には、液量を増やしてご使用ください。
• ご使用の際には、ゴム手袋などを着用してください。
• 本製品は、酸性の色素溶液です。使用後の廃液類は適正な処理を行って廃棄してください。
• 脱色を 2 日間以上行いますと、染色されたバンドが多少退色することがあります。
• 電子レンジで加熱した染色液を取り扱う際には、火傷しないよう手袋を着用してください。
• 加熱操作は沸騰したらすぐに終了するように時間を調整してください。
• 電子レンジによる加熱時間は、機種によって異なります。

CBB Stain One を用いた MS 解析

ペプチドマスフィンガープリンティングを行い、mascot サーチにより同定を行った結果、抽出したスポットは、酵母 SSB2 タンパク質であると同定されました。

データご提供：京都市産業技術研究所 工業技術センター 微生物応用チーム

CBB Stain One を用いた MS への適用プロトコール

1. CBB Stain One を用いて、定法により二次元電気泳動後のゲルを染色します。その後ゲルを水でよく洗浄します。
2. 洗浄した水の pH が中性付近になったことを確認し（pH 試験紙などでチェック）、対象スポットのタンパク質をゲルから切り出します。
3. ゲルをエッペンチューブに入れ水で 2 回程度洗浄後、よく水を切ってアセトニトリルを 200 μL 加えます。ゲルが脱水されて白色になれば、アセトニトリルを捨てよく乾燥します。（急ぎの場合は真空ポンプを利用してください。）
4. 乾燥後、酵素液（本実験ではリシルエンドペプチダーゼ^®）を 20 μL 程度入れます。
   酵素液濃度：25 ng/μL（pH 9.0、10 mM トリス塩酸緩衝液）
5. 冷蔵庫で酵素液を十分にゲルに浸透させた後、残存する酵素液を除去し 10 mM トリス緩衝液（酵素不含）を 40 μL 入れて一晩 37℃ で分解します。
6. その後冷凍し、マス解析にかけます。

リシルエンドペプチダ－ゼ^® は、富士フイルム和光純薬株式会社の登録商標です。