StemBeadsで育てたiPS細胞やES細胞のコロニーは典型的な形態を示すことが実証されています。
データご提供：京都大学 物質-細胞統合システム拠点 (iCeMS)　長谷川 光一 講師 / 吉田 則子 研究員

ヒト iPS細胞株 253G1^*

ヒト ES細胞株 KhES-1

ヒト ES細胞株 H9

データご提供：

国立大学法人京都大学大学院 薬学研究科 ナノバイオ医薬創成科学　武井 義則 特定助教

実験概要

5日齢BALB/cマウス脳室下帯由来の神経幹細胞をポリオルニチンとラミニンをコートしたデッシュ上で培養した。表記の成長因子を含むN2B27培地で培地交換を行わずに3日間培養後、細胞を固定して免疫染色を行った。

結果

red：GFAP / green：Sox2 / blue：nuclei

StemBeads EGFとStemBeads FGF2を用いた時だけ、幹細胞マーカーのGFAPとSox-2の発現が維持されており、細胞の形も均一で幹細胞様の形態を維持していた。

FGF量の変化

従来法によりFGF2を添加した場合、安定性の問題により、FGF2は激減します。StemBeadsを使用すると、3日間一定量でFGF2が徐放されます。

従来法との未分化マーカーの発現量、核型解析、コロニー形態の比較

MEFフィーダー細胞上で1カ月間培養したヒトES細胞のFACS解析では、本製品を添加した培地を3日に一度の培地交換により培養した細胞と従来法により培養した細胞で類似したプロファイルを示します。しかし、qRT-PCRの結果では、NANOGの発現量が著しく上昇し、分化マーカーのSOX17やBrachyuryは著しく減少しました。hESCの正常核型を増殖前に評価して、従来法または本製品使用による増殖後1カ月の細胞についても評価しました。その結果、いずれも、異常は確認されませんでした。免疫細胞染色では、本製品の使用と従来法を比較した結果、コロニーの形態や多能性マーカーであるOCT4、NANOGの発現量が類似していました（Scale bars=50 microns）。

従来法とのマウス神経幹細胞における未分化状態維持の比較

FGF2 Beadsは、マウスの神経幹細胞について未分化状態の維持に優れることが示されています。本製品を添加した培地を用い1週間培養したマウスの神経幹細胞は、従来法やFGF2を含まない場合と比較して前駆細胞（Nestin+）の数が上昇し、神経に分化した細胞（TUJ1+）の数が減少することが示されています（Scale bars=50 microns）。
ここには掲載していませんが、ヒトの神経幹細胞でも同様の結果が得られています。

1. チューブの底にStemBeadsが沈んでいるため、懸濁液を再混合します。
2. 培地1 mLに対し、7.5 µLのStemBeadsを混合します。
   細胞種によりますが、細胞密度は低-中程度になるようにしますと、3日間培地交換なしで培養可能となります。
   注）継代翌日に培地交換が必要なケースが多く報告されています。