ナカライテスク株式会社

SDS-PAGE ~ CBB 染色 / ウェスタンブロッティング
高速化試薬 Bullet シリーズ

  • 電気泳動

Bullet シリーズは SDS-PAGE から CBB 染色もしくはウェスタンブロッティングを高速化する試薬です。
シリーズすべてを使用することにより、CBB 染色が約 30 分、ウェスタンブロッティングが約 2 時間で完了できます。

特長
  • Fast(速い)
    SDS-PAGE:約 10 分、CBB 染色:15 分、転写:10 分、ブロッキング:5 分、抗体反応:約半分へ短縮
  • Precise(正確)
    バンドのゆがみもなく、感度も従来と同等に検出可能
  • Flexible(柔軟)
    一部の工程のみでも高速化可能

Bullet シリーズはすべて ready to use です。調製の手間やミスを減らすことができ、高い再現性を実現します。

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製品説明

ラインアップ

Bullet シリーズを使用することにより、CBB 染色が約 30 分、ウェスタンブロッティングが約 2 時間で完了できます。また、Bullet PAGE Plus のみ使用して SDS-PAGE を約 10 分、Bullet Blocking One のみ使用してブロッキングを 5 分に短縮するといった、一部の工程のみの高速化も可能です。

SDS-PAGE

Bullet PAGE Plus Precast Gel

約 10 分
 
CBB 染色   転写

Bullet CBB Stain Lite

 

Bullet Semi-dry Transfer One

15 分   10 分
 
Total 約 30 分   ブロッキング
   

Bullet Blocking One

    5 分
   
    抗原抗体反応
   

Bullet ImmunoReaction Buffer

    約半分へ短縮
   
    化学発光検出
   

Chemi-Lumi One シリーズ

   
    Total 約 2 時間

製品使用例

SDS-PAGE ~ CBB 染色

Bullet PAGE Plus と Bullet CBB Stain Lite を組み合わせることで、電気泳動から染色までを約 30 分で行うことができます。 Bullet PAGE Plus のみ、Bullet CBB Stain Lite のみ使用して SDS-PAGE を約 10 分、CBB 染色を 15 分に短縮するといった、一部の工程のみの高速化も可能です。

  Bullet シリーズ 従来手法
組み合わせ
  • 一般的な SDS-PAGE 用ゲル
  • 一般的な CBB 染色試薬
電気泳動 約 10 分(400 V) 約 1 時間(200 V)
CBB 染色 前操作 必要なし 約 15 分
染色 15 分 30 ~ 60 分
脱色 必要なし 1 時間以上
約 30 分 約 3 時間

<注意事項>
・装置・泳動の準備、サンプル添加、泳動ゲルの取り出しに要する時間などは含めていません。
・従来手法は一例であり、各工程に要する時間は実験方法によって変わります。

実施例

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実験条件
泳動ゲル : Bullet PAGE Plus Precast Gel, 5-20%, 17wells(#21794-54)
サンプル : 大腸菌を試料緩衝液 (SDS-PAGE 用 , 2 倍濃縮 , 2-ME 含有 )(#30566-22)を用いて溶解
染色 : Bullet CBB Stain Lite 20 mL 中で 15 分染色
※染色像は染色中の容器内で確認可能

SDS-PAGE ~ ウェスタンブロッティング

Bullet シリーズの製品をすべて使用することで、電気泳動からウェスタンブロッティングまでを約 2 時間で行うことができます。 Bullet シリーズ製品の一部を用いて、 各工程のみの高速化も可能です。

  Bulletシリーズ 従来手法
SDS-PAGE ゲル作製 - 約120分
泳動 約10分(400 V) 約60分(200 V)
転写 平衡化 - 10-20分
転写 10分(25 V) 45分(10 V)
洗浄 5分×2回 5分×2回
ブロッキング ブロッキング 5分 60分
洗浄 5分 5分
抗原抗体反応 一次抗体反応 30分* 60分
洗浄 5分×3回 5分×3回
二次抗体反応 30分* 60分
洗浄 5分×3回 5分×3回
検出 約10分
総計 約2時間 約8時間
使用製品
  • Laemmli法組成自家調製ゲル
  • セミドライ式ウェスタンブロッティング緩衝液     (例) Towbin 法組成
  • ブロッキング剤                  (例) 5%スキムミルク
  • 抗体希釈液                   (例)0.1%-tTBS

 

*反応時間は従来の半分を目安に行ってください。(現在、一次抗体反応を冷蔵で一晩行っている場合は、室温で30~60分を目安にしてください。)

<注意事項>
・装置・泳動の準備、サンプル添加に要する時間などは含めていません。
・従来手法は一例であり、各工程に要する時間は実験方法によって変わります。
 

実施例

Bullet シリーズを用いることで、わずか 2 時間で従来手法と同等の結果を得ることができます。

 

 

  Bulletシリーズ 従来手法
ブロッティング像 画像1.jpg 画像2.jpg
サンプル HeLa 細胞タンパク質抽出液 5 µg より 2 倍希釈系列
SDS-PAGE Bullet PAGE Plus Precast Gel, 
10%, 17wells

400 V

10

Laemmli 法組成自家調製ゲル, 
10%, 14wells
ゲル作製

120

200 V 約60分
転写 Bullet Semi-dry Transfer One

25 V

10

Towbin 法組成
20%メタノール, 192 mMグリシン, 25 mM Tris HCl pH8.3
平衡化

15

10 V

45

ブロッキング Bullet Blocking One for Western Blotting

5

5% スキムミルク 60分
一次抗体反応*1 Bullet ImmunoReaction Buffer
で抗体を希釈

30

0.1%-tTBS で抗体を希釈

60

二次抗体反応*2 Bullet ImmunoReaction Buffer
で抗体を希釈

30

0.1%-tTBS で抗体を希釈

60

検出

Chemi-Lumi One Super/ChemiDoc Touch MP 3 × 3 ビニング(バイオ・ラッド ラボラトリーズ)(AUTOモード)

合計時間
(洗浄時間を含む)

約2時間

8時間

 

*1 一次抗体:GAPDH Antibody(Novus #NB300-322)10,000 倍希釈
*2 二次抗体:Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP] (Pre-adsorbed)(Novus #NB7187)200,000 倍希釈

関連動画

約 10分!!とっても速いゲルで泳動してみた。

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