SDS-PAGE ~ CBB 染色 / ウェスタンブロッティング
高速化試薬 Bullet シリーズ
高速化試薬 Bullet シリーズ
Bullet シリーズは SDS-PAGE から CBB 染色もしくはウェスタンブロッティングを高速化する試薬です。
シリーズすべてを使用することにより、CBB 染色が約 30 分、ウェスタンブロッティングが約 2 時間で完了できます。
- Fast(速い)
SDS-PAGE:約 10 分、CBB 染色:15 分、転写:10 分、ブロッキング:5 分、抗体反応:約半分へ短縮 - Precise(正確)
バンドのゆがみもなく、感度も従来と同等に検出可能 - Flexible(柔軟)
一部の工程のみでも高速化可能
Bullet シリーズはすべて ready to use です。調製の手間やミスを減らすことができ、高い再現性を実現します。
製品説明
ラインアップ
Bullet シリーズを使用することにより、CBB 染色が約 30 分、ウェスタンブロッティングが約 2 時間で完了できます。また、Bullet PAGE Plus のみ使用して SDS-PAGE を約 10 分、Bullet Blocking One のみ使用してブロッキングを 5 分に短縮するといった、一部の工程のみの高速化も可能です。
SDS-PAGE | ||
約 10 分 | ||
↓ | ↓ | |
CBB 染色 | 転写 | |
|
||
15 分 | 10 分 | |
↓ | ↓ | |
Total 約 30 分 | ブロッキング | |
5 分 | ||
↓ | ||
抗原抗体反応 | ||
約半分へ短縮 | ||
↓ | ||
化学発光検出 | ||
Chemi-Lumi One シリーズ |
||
↓ | ||
Total 約 2 時間 |
製品使用例
SDS-PAGE ~ CBB 染色
Bullet PAGE Plus と Bullet CBB Stain Lite を組み合わせることで、電気泳動から染色までを約 30 分で行うことができます。 Bullet PAGE Plus のみ、Bullet CBB Stain Lite のみ使用して SDS-PAGE を約 10 分、CBB 染色を 15 分に短縮するといった、一部の工程のみの高速化も可能です。
Bullet シリーズ | 従来手法 | ||
---|---|---|---|
組み合わせ |
|
||
電気泳動 | 約 10 分(400 V) | 約 1 時間(200 V) | |
CBB 染色 | 前操作 | 必要なし | 約 15 分 |
染色 | 15 分 | 30 ~ 60 分 | |
脱色 | 必要なし | 1 時間以上 | |
計 | 約 30 分 | 約 3 時間 |
<注意事項>
・装置・泳動の準備、サンプル添加、泳動ゲルの取り出しに要する時間などは含めていません。
・従来手法は一例であり、各工程に要する時間は実験方法によって変わります。
実施例

実験条件 | |||||
泳動ゲル | : | Bullet PAGE Plus Precast Gel, 5-20%, 17wells(#21794-54) | |||
サンプル | : | 大腸菌を試料緩衝液 (SDS-PAGE 用 , 2 倍濃縮 , 2-ME 含有 )(#30566-22)を用いて溶解 | |||
染色 | : | Bullet CBB Stain Lite 20 mL 中で 15 分染色 ※染色像は染色中の容器内で確認可能 |
SDS-PAGE ~ ウェスタンブロッティング
Bullet シリーズの製品をすべて使用することで、電気泳動からウェスタンブロッティングまでを約 2 時間で行うことができます。 Bullet シリーズ製品の一部を用いて、 各工程のみの高速化も可能です。
Bulletシリーズ | 従来手法 | ||
---|---|---|---|
SDS-PAGE | ゲル作製 | - | 約120分 |
泳動 | 約10分(400 V) | 約60分(200 V) | |
転写 | 平衡化 | - | 10-20分 |
転写 | 10分(25 V) | 45分(10 V) | |
洗浄 | 5分×2回 | 5分×2回 | |
ブロッキング | ブロッキング | 5分 | 60分 |
洗浄 | 5分 | 5分 | |
抗原抗体反応 | 一次抗体反応 | 30分* | 60分 |
洗浄 | 5分×3回 | 5分×3回 | |
二次抗体反応 | 30分* | 60分 | |
洗浄 | 5分×3回 | 5分×3回 | |
検出 | 約10分 | ||
総計 | 約2時間 | 約8時間 | |
使用製品 |
|
*反応時間は従来の半分を目安に行ってください。(現在、一次抗体反応を冷蔵で一晩行っている場合は、室温で30~60分を目安にしてください。)
<注意事項>
・装置・泳動の準備、サンプル添加に要する時間などは含めていません。
・従来手法は一例であり、各工程に要する時間は実験方法によって変わります。
実施例
Bullet シリーズを用いることで、わずか 2 時間で従来手法と同等の結果を得ることができます。
Bulletシリーズ | 従来手法 | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
ブロッティング像 | ![]() |
![]() |
||||
サンプル | HeLa 細胞タンパク質抽出液 5 µg より 2 倍希釈系列 | |||||
SDS-PAGE | Bullet PAGE Plus Precast Gel, 10%, 17wells |
400 V |
約10分 |
Laemmli 法組成自家調製ゲル, 10%, 14wells |
ゲル作製 |
約120分 |
200 V | 約60分 | |||||
転写 | Bullet Semi-dry Transfer One |
25 V |
10分 |
Towbin 法組成 20%メタノール, 192 mMグリシン, 25 mM Tris HCl pH8.3 |
平衡化 |
15分 |
10 V |
45分 |
|||||
ブロッキング | Bullet Blocking One for Western Blotting |
5分 |
5% スキムミルク | 60分 | ||
一次抗体反応*1 | Bullet ImmunoReaction Buffer で抗体を希釈 |
30分 |
0.1%-tTBS で抗体を希釈 |
60分 |
||
二次抗体反応*2 | Bullet ImmunoReaction Buffer で抗体を希釈 |
30分 |
0.1%-tTBS で抗体を希釈 |
60分 |
||
検出 |
Chemi-Lumi One Super/ChemiDoc Touch MP 3 × 3 ビニング(バイオ・ラッド ラボラトリーズ)(AUTOモード) |
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合計時間 |
約2時間 |
約8時間 |
*1 一次抗体:GAPDH Antibody(Novus #NB300-322)10,000 倍希釈
*2 二次抗体:Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP] (Pre-adsorbed)(Novus #NB7187)200,000 倍希釈
関連動画
約 10分!!とっても速いゲルで泳動してみた。
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