ナカライテスク株式会社

モノクローナル標識Tag抗体

Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, Agarose Conjugate

アガロースを結合した抗体は、細胞ライセートからのタンパク質の免疫沈降などに用いられます。

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製品説明

製品説明

Clone MC045
Isotype IgG1-κ(Mouse)
Size 500 μg
Antibody Protein ca. 2 mg antibody/ml agarose
Product form 1 : 1 suspension in Dulbecco's PBS(-)

c-Myc tagged Protein との反応

  1. 均一に懸濁させたAnti-c-Myc-Agarose(#04145-55)0.05 mlをフタ付きポリプロピレン容器(0.5 ml)に分注し、Rinse buffer 0.4 ml、および c-Myc tagged protein(1 mg/ml)1 μlを添加して静かに転倒攪拌する(室温、2 時間)。
  2. 遠心分離(10 秒間)で樹脂を沈殿させた後、Rinse buffer を分注器で吸引除去する。さらに、新たな Rinse buffer 0.4 ml を加えて転倒攪拌(10 秒間)して遠心分離する。(5 回繰り返し)
  3. Rinse buffer を濾紙片で十分に吸引除去した Agarose 樹脂、未使用の同 Agarose 樹脂、およびフタ付きポリプロピレン容器(0.5 ml)に分注した c-Myc tagged protein(1 mg/ml)1 μl、の各々に SDS-PAGE 電気泳動緩衝液(+2ME)0.05 mlを添加して煮沸水浴で加熱(5 分間)する。
  4. 水冷後に遠心分離(10 秒間)して、各上清 1 μlを SDS-PAGE(10%)で電気泳動する。

*Rinse buffer : 50mM Tris-HCl pH7.5, 150mM NaCl, 1%(v/v)NP-40, 10mM EDTA, 1mM PMSF, 10μM pepstatin, 20μM leupeptin

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SDS-PAGE(10%) : 30mA constant, 60分
サンプル : ①M.W. Marker
②Anti-c-Myc-Agarose + c-Myc tagged protein
③Anti-c-Myc-Agarose
④c-Myc tagged protein

Anti-c-Myc-Agarose(左図③)に c-Myc tagged protein(左図④)を反応させた結果、c-Myc tagged protein は Agarose 樹脂に結合した(左図②)。

非特異吸着の確認

使用例 2 と同様の手順で c-Myc tagged protein(1 mg/ml)を bacterial lysate 1 μL に変えて操作しました。

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SDS-PAGE(10%) : 30mA constant, 60分
サンプル : ①M.W. Marker
②Anti-bacterial lysate
③Anti-c-Myc-Agarose + bacterial lysate

不特定多数のタンパク質を含有する bacterial lysate を Anti-c-Myc-Agarose に反応させても、非特異的なタンパク質の樹脂吸着はほとんどおこっていません。

顧客使用例

c-Myc タグの付いたプラスミドを細胞にトランスフェクションしました。その後細胞ライセートを c-Myc-Agarose 抗体で免疫沈降し、ウェスタンブロッティングでの検出を行いました。

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免疫沈降 : Anti-c-Myc, Agarose conjugate(1 : 500)
ウェスタンブロッティング : Anti-c-Myc(#04362)
本データは国立大学 研究者様よりご提供いただきました。

関連資料

価格表

製品名 製品番号 容量 オンライン
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Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, Agarose Conjugate 04145-55 500 μg e-Nacalai.jpg

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