モノクローナル標識Tag抗体
Anti-c-Myc(Mouse IgG1-κ), Monoclonal(MC045), AS, Agarose Conjugate
アガロースを結合した抗体は、細胞ライセートからのタンパク質の免疫沈降などに用いられます。
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製品説明
製品説明
Clone | MC045 |
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Isotype | IgG1-κ(Mouse) |
Size | 500 μg |
Antibody Protein | ca. 2 mg antibody/ml agarose |
Product form | 1 : 1 suspension in Dulbecco's PBS(-) |
c-Myc tagged Protein との反応
- 均一に懸濁させたAnti-c-Myc-Agarose(#04145-55)0.05 mlをフタ付きポリプロピレン容器(0.5 ml)に分注し、Rinse buffer 0.4 ml、および c-Myc tagged protein(1 mg/ml)1 μlを添加して静かに転倒攪拌する(室温、2 時間)。
- 遠心分離(10 秒間)で樹脂を沈殿させた後、Rinse buffer を分注器で吸引除去する。さらに、新たな Rinse buffer 0.4 ml を加えて転倒攪拌(10 秒間)して遠心分離する。(5 回繰り返し)
- Rinse buffer を濾紙片で十分に吸引除去した Agarose 樹脂、未使用の同 Agarose 樹脂、およびフタ付きポリプロピレン容器(0.5 ml)に分注した c-Myc tagged protein(1 mg/ml)1 μl、の各々に SDS-PAGE 電気泳動緩衝液(+2ME)0.05 mlを添加して煮沸水浴で加熱(5 分間)する。
- 水冷後に遠心分離(10 秒間)して、各上清 1 μlを SDS-PAGE(10%)で電気泳動する。
*Rinse buffer : 50mM Tris-HCl pH7.5, 150mM NaCl, 1%(v/v)NP-40, 10mM EDTA, 1mM PMSF, 10μM pepstatin, 20μM leupeptin

SDS-PAGE(10%) | : | 30mA constant, 60分 |
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サンプル | : | ①M.W. Marker ②Anti-c-Myc-Agarose + c-Myc tagged protein ③Anti-c-Myc-Agarose ④c-Myc tagged protein |
Anti-c-Myc-Agarose(左図③)に c-Myc tagged protein(左図④)を反応させた結果、c-Myc tagged protein は Agarose 樹脂に結合した(左図②)。
非特異吸着の確認
使用例 2 と同様の手順で c-Myc tagged protein(1 mg/ml)を bacterial lysate 1 μL に変えて操作しました。

SDS-PAGE(10%) | : | 30mA constant, 60分 |
サンプル | : | ①M.W. Marker ②Anti-bacterial lysate ③Anti-c-Myc-Agarose + bacterial lysate |
不特定多数のタンパク質を含有する bacterial lysate を Anti-c-Myc-Agarose に反応させても、非特異的なタンパク質の樹脂吸着はほとんどおこっていません。
顧客使用例
c-Myc タグの付いたプラスミドを細胞にトランスフェクションしました。その後細胞ライセートを c-Myc-Agarose 抗体で免疫沈降し、ウェスタンブロッティングでの検出を行いました。

免疫沈降 | : | Anti-c-Myc, Agarose conjugate(1 : 500) |
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ウェスタンブロッティング | : | Anti-c-Myc(#04362) |
本データは国立大学 研究者様よりご提供いただきました。
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