SDS-PAGE ～ CBB 染色 / ウェスタンブロッティング 高速化試薬 Bullet シリーズ
Bullet シリーズは SDS-PAGE から CBB 染色もしくはウェスタンブロッティングを高速化する試薬です。
シリーズすべてを使用することにより、CBB 染色が約 30 分、ウェスタンブロッティングが約 2 時間で完了できます。
製品紹介動画
特長
- Fast（速い）
SDS-PAGE：約 10 分、CBB 染色：15 分、転写：10 分、ブロッキング：5 分、抗体反応：約半分へ短縮 - Precise（正確）
バンドのゆがみもなく、感度も従来と同等に検出可能 - Flexible（柔軟）
一部の工程のみでも高速化可能
Bullet シリーズはすべて ready to use です。調製の手間やミスを減らすことができ、高い再現性を実現します。
ラインアップ
Bullet シリーズを使用することにより、CBB 染色が約 30 分、ウェスタンブロッティングが約 2 時間で完了できます。また、Bullet PAGE One のみ使用して SDS-PAGE を約 10 分、Bullet Blocking One のみ使用してブロッキングを 5 分に短縮するといった、一部の工程のみの高速化も可能です。
| SDS-PAGE | ||
| 約 10 分 | ||
| ↓ | ↓ | |
| CBB 染色 | 転写 | |
| 15 分 | 10 分 | |
| ↓ | ↓ | |
| Total 約 30 分 | ブロッキング | |
| 5 分 | ||
| ↓ | ||
| 抗原抗体反応 | ||
| 約半分へ短縮 | ||
| ↓ | ||
| 化学発光検出 | ||
|
Chemi-Lumi One シリーズ |
||
| ↓ | ||
| Total 約 2 時間 | ||
SDS-PAGE ～ CBB 染色
Bullet PAGE One と Bullet CBB Stain One を組み合わせることで、電気泳動から染色までを約 30 分で行うことができます。 Bullet PAGE One のみ、Bullet CBB Stain One のみ使用して SDS-PAGE を約 10 分、CBB 染色を 15 分に短縮するといった、一部の工程のみの高速化も可能です。
| Bullet シリーズ | 従来手法 | ||
|---|---|---|---|
| 組み合わせ |
|
||
| 電気泳動 | 約 10 分（400 V） | 約 1 時間（200 V） | |
| CBB 染色 | 前操作 | 必要なし | 約 15 分 |
| 染色 | 15 分 | 30 ～ 60 分 | |
| 脱色 | 必要なし | 1 時間以上 | |
| 計 | 約 30 分 | 約 3 時間 | |
<注意事項>
・装置・泳動の準備、サンプル添加、泳動ゲルの取り出しに要する時間などは含めていません。
・従来手法は一例であり、各工程に要する時間は実験方法によって変わります。
実施例
17 ウェルタイプの Bullet PAGE One Precast Gel を用いると、サンプル 16 検体が約 30 分で分析できます。（ゲル 2 枚使用時は、32 検体が分析可能）
| 実験条件 | ||||
|---|---|---|---|---|
| 泳動ゲル | Bullet PAGE One Precast Gel, 5-15%, 17wells（#13080-44） | |||
| サンプル | ①タンパク質マーカー(10x)（#29458-24）を 1/10 に希釈後、3 µL/ウェル添加 ② ～ ⑰大腸菌由来タンパク質を以下の容量で各ウェルに添加 ②⑥⑩⑭ 1 µL、③⑦⑪⑮ 2 µL、④⑧⑫⑯ 3 µL、⑤⑨⑬⑰ 4 µL を添加 |
|||
| 染色 |
Bullet CBB Stain One 20 mL 中で 15 分染色 ※染色像は染色中の容器内で確認可能 |
|||
SDS-PAGE ～ ウェスタンブロッティング
Bullet PAGE シリーズをすべてを組み合わせることで、電気泳動からウェスタンブロッティングまでを約 2 時間で行うことができます。Bullet PAGE One のみ、Bullet Blocking One のみ使用して、SDS-PAGE を約 10 分、ブロッキングを 5 分に短縮するといった、一部の工程のみの高速化も可能です。
| Bullet シリーズ | 従来手法 | ||
|---|---|---|---|
| 組み合わせ |
|
||
| 電気泳動 | 約 10 分（400 V） | 約 1 時間（200 V） | |
| 転写 | 10 分（25 V） | 約 45 分（10 V） | |
| ブロッキング | 5 分 | 約 1 時間 | |
| 抗体反応 | 従来手法の半分 | 1 時間 ～ 一晩 | |
| 検出 | 約 10 分 | ||
| 計 | 約 2 時間 | 約 5 時間 30 分 ～ | |
<注意事項>
・装置・泳動の準備、サンプル添加に要する時間などは含めていません。
・従来手法は一例であり、各工程に要する時間は実験方法によって変わります。
実施例
Bullet シリーズを用いることで、わずか 2 時間で従来手法と同等の結果を得ることができます。
| Bullet シリーズ | 従来手法 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| ブロッ ティング像 |
 |
 |
||||
| サンプル | HeLa 細胞タンパク質抽出液 5 µg より 2 倍希釈系列 | |||||
| 電気泳動 |
Bullet PAGE One Precast Gel, |
400 V | 10 分 |
Laemmli 法組成ゲル |
200 V | 60 分 |
| 転写 |
Bullet Semi-dry Transfer One |
25 V | 10 分 | セミドライウェスタンブロッティング用転写緩衝液 | 10 V | 45 分 |
| ブロッキング |
Bullet Blocking One |
5 分 | 5% スキムミルク | 60分 | ||
|
一次抗体*1 |
Bullet ImmunoReaction Buffer で抗体を希釈 |
30 分 | 0.1%-tTBS で抗体を希釈 | 60 分 | ||
|
二次抗体*2 |
Bullet ImmunoReaction Buffer |
30 分 | 0.1%-tTBS で抗体を希釈 | 60 分 | ||
|
検出 |
Chemi-Lumi One Super / LAS-3000（High モード） 露光時間 5 分 | |||||
|
計（洗浄時間を含む） |
約 2 時間 | 約 5 時間 30 分 | ||||
*1 一次抗体:GAPDH Antibody（Novus #NB300-322）10,000 倍希釈
*2 二次抗体:Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody [HRP] (Pre-adsorbed)（Novus #NB7187）200,000 倍希釈
