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피크 안 나옴

T3. 피크 안 나옴

[원인 확인하는 법] 다음을 먼저 체크

분석 결과		원인
검출이 안됨		검출기 불량
머무름 시간(RT)이 이동함		펌프 불량
머무름 시간(RT)이 이상하게 동일하게 나음		칼람 불량

● 각 칼람 타입에 대한 해답

칼람 타입		원인	해답
역상 크로마토그라피 칼람		시료가 높은 친 유성으로 인해 칼람에 계속 머무르고 있음.	시료가 나올 때 까지 이동상의 극성도 높여 흘림 . 예., 1. 메탄올 또는 아세토나이트릴 농도를 높임(최대 100%). 2. 만약 시료가 계속 안 나오면 메탄올 또는 아세토나이트릴에 20-30%의 고농도 유기용매첨가(예., THF 또는 클로로포름)(예., THF :메탄올 = 30 : 70).
		금속 배위화합물 또는 염기성 화합물은 칼람에흡착될 수 있습니다.	염기성 화합물은 충진물의 잔류 실라놀(silanols)과 반응할 수 있습니다. 잔류 실라놀이 적은COSMOSIL 5C18-MS-II 칼람을 사용하거나 이동상에 0.1-1%의 산을 첨가한다. (예., trifluroacetic acid, acetic acid)
		금속 배위화합물 또는 염기성 화합물은 칼람에흡착될 수 있습니다.	금속 배위화합물은 충진물에 있는 금속성분과반응합니다. 5 mmol/l di-sodium dihydrogen ethylenediaminetetraacetate dihydrate (EDTA ・2Na) 을용매에 첨가합니다.

순상 크로마토그라피 칼람		너무 강한 친 유성 시료는 칼람 안에 계속 머무른다.	시료가 나올 때까지 이동상의 극성도 높여 흘림. 에탄올과 같은 강한 용매로 교체하고 흘리거나 용매 농도를 증가시킨다.
순상 크로마토그라피 칼람		금속 배위화합물 또는 염기성 화합물이 칼람 충진물에 흡착한다.	이동상에 0.1-1% 산을 첨가한다. (예., trifluoroacetic acid, acetic acid).

당류 분석용 칼람 (Sugar-D, NH2-MS) 또는 친 수성 크로마토그라피칼람(HILIC)		시료는 COSMOSIL 5NH2-MS 칼람의 아미노 그룹에 흡착한다.	흡착율이 적은 COSMOSIL Sugar-D 칼람을 사용한다.
당류 분석용 칼람 (Sugar-D, NH2-MS) 또는 친 수성 크로마토그라피칼람(HILIC)		시료가 높은 친 수성 때문에 칼람에 오래 머문다.	시료가 용출될 때까지 이동상의 물의 농도를 높인다. COSMOSIL Sugar-D 또 는 COSMOSIL HILIC칼람은 100% 수용성 이동상에 호환성이 양호하며 COSMOSIL 5NH2-MS 칼람은 50% 의이동상에 양호합니다(예., 아세토나이트릴 : 물= 50 : 50).

겔 침투 크로마토그라피 칼람(Diol)		시료는 실라놀 그룹(silinol group)에 이온성 효과를 같습니다.	이동상의 이온강도를 증가시키기 의하여 약 0.3mol/l의 염(NaCl)을 가한다.
		시료는 실라놀 그룹(silinol group)에 이온성 효과를 같습니다.	A이동상을 pH 5.5에 맞춘다. 또는 이온성 작용을 방지하기 위하여 pH를 낮게 조정한다.
		친 유성 작용으로 시료가 흡착한다.	10-50%의 유기용매를 가한다.(예., 아세토나이트릴).

친 유성 크로마토그라피 칼람 (HIC)		시료의 친 유성 이 너무 강하다.	5%의 유기용매를 가한다(예.,메탄올 또는 아세토나이트릴).
친 유성 크로마토그라피 칼람 (HIC)		시료는 주입 전에 암모늄 설페이트(ammonium sulfate)가 석출될 수 있습니다.	암모늄 설페이트을 0.5mol/l 또는 석출이 안될때 까지 농도를 낮게 맞춘다.

● 펌프 불량

원인		해답
공기가 펌프 안에서 발생합니다.		공기 제거(180 페이지 T7 참조).
용매 누출		각 연결 부위 강하게 잠그고 또는 튜빙 류 교체.

● 검출기 불량

원인		해답
검출기가 올바르게 연결되지 않음.		올바르게 연결하기 위하여 검출기 매뉴얼 참조.
검출기에서 불량 신호가 나옴		검출기 제조사에 연락.
UV흡수 범위가 시료에 맞지 않다.		시료가 적당한 UV흡수에 맞도록 한 후 분석한다. 만약 시료의 양이 적거나 UV흡수가 미약하면 굴절율(RI) 검출기를 사용하거나또는 ELSD 검출기를 사용합니다. 또는 시료에 라벨링 시약을 사용한다.

T4. 불안정한 베이스라인

원인		해답
전에 사용했던 칼람에 흡착했던 불순물이 나옴.		강한 용매로 세척(170 페이지 Q13 참조).

COSMOSIL PE-MS,πNAP, PYE, NPE, PBB-R, Cholester 칼람에서 고정상에 붙어 있던 UV흡수를 갖는 물질이 떨어져 나와 베이스라인이 불안정합니다.		강한 용매로 세척합니다(170 페이지 Q13을 참조.)

갑자지 변하는 펌프 압력은 펌프 내에서 공기가발생하거나 공기 유입이 원인일 수 있습니다.		용매 탈기(180 페이지 T7 참조).

굴절율 검출기를 사용할 때(RI 검출기)
큰 온도 변화		일정한 온도를 유지하기 위해서 항 온조를 사용. RI검출기 또는 튜빙으로 직접 냉방기 바람이 직접 가지 않도록 한다. 주의; 냉방기로부터 온도변화를 피하기 의해서 장비 또는 튜빙에 커버를 장치한다.
이동상 내의 잔류 가스 또는 미세 공기 변화.		용매 탈기(초음파 또는 공기 흡인장치(aspirator)이용).

UV/VIS 검출기에서 바늘과 같은 날카로운 피크 발생
칼람 또는 검출기 안에 공기가 존재.		공기를 제거하기 위해서 검출기 출구를 막고 압력을 증가시킨다. 주의; 검출기 출구를 막을 때 너무 높은 압력을 가할 때는 검출기 셀이 깨질 염려가있으므로 조심한다. 만약 계속해서 문제가 지속될 때 검출기에서 컬럼을 제거하고 15분 동안 부피가 큰 2-propanol 과 같은 용매를 흘립니다.
칼 람 의 온 도 를 이 동 상 용 매 비 등 점(boiling point) 이상으로 높게 사용하면 공기가 발생할수 있습니다.		적절한 온도로 분석합니다. 기본적으로 20-50 oC 범위내의 온도로 칼람을 사용합니다. 주의; 20-50 oC 범위내에서 최적의 분석결과를 얻기 위해서 이동상의 비등점 이하로사용합니다. (예., 메탄올의 경우[비등점: 64.7oC], 45oC 또는 이하에서 사용).

버퍼나 이동상에 이온 페어링 시약를 사용할 때
칼람의 불충분한 평형		평형시간을 길게 한다. 이온 페어링 시약이 첨가한 이동상이나 버퍼 사용할 때필요할 때, 염이 첨가 안된 이동상은 평형 시간이 매우 깁니다.
염은 이동상 내에서 석출될 수 있으며 이동상용기가 흐려질 수 있습니다.		a) 버퍼의 농도를 줄인다. (예., 100 mmol/l → 20 mmol/l) (b) 다른 버퍼용액으로 교체한다. (예., 인산 버퍼→ 초산 버퍼) (c) 유기용매 농도를 줄인다. (예., 70% 아세토나이트릴 : 물 = 70 : 30 → 50 : 50) (d) 다른 유기용매로 교체한다. (예., 에세토나이트릴 → 메탄올l)

T5. 불안정한 머무름 시간

● 장비가 원인

장비		원인	해답
펌프		펌프의 체크 밸브내에 공기 존재.	탈기 (180 페이지 T7참조). 순상용매는 비등점이 낮기 때문에 공기가 쉽게발생합니다. 뿐만 아니라 점도가 낮기 때문에용출 시 공기가 발생할 수 있습니다.
펌프		용매 누설	새는 부분 찾아 조임. 만약 계속 누설하면 새는부위를 교체한다.
항 온조 (온도조절)		항 온조나 칼람 오븐을 사용하지 않으면 이 원인으로 칼람의 온도가 변화.	칼람 온도를 일정하게 유지하기 위하여 항 온조나 칼람 오븐을 사용한다. 주의; 실내 온도 조건에서 분석을 할 때는 실내 온도보다 5oC 높게 항 온조나 칼람 오븐의 온도를맞춘다.

● 칼람이 원인

칼람 타입		원인	해답
역상 칼람		이온 페어링 시약을 사용할 때 불충분한 칼람평형 시간.	평형시간을 길게 한다. 이온 페어링 시약을 첨가한 이동상이나 버퍼를 사용할 때, 긴 평형 시간이 필요합니다.
역상 칼람		C18 칼람에서 만약 100%물을 이동상으로 사용하면 머무름 시간 증가로 시료 용출이 안되거나흡착이 발생.	COSMOSIL C18-PAQ 칼람은 100% 수용성 이동상 호환 칼람입니다(18 페이지 참조). 주의; 불안정한 머무름 시간을 개선하기 의해서 고 농도 유기용매로 세척하면 회복될 수 있다(예., 메탄올 : 물 = 70 : 30).
순상 칼람		유기용매에 소량의 물은 머무름 시간에 영향을줍니다.	COSMOSIL C18-PAQ 칼람은 100% 수용성 이동상 호환 칼람입니다(18 페이지 참조). 주의; 불안정한 머무름 시간을 개선하기 의해서 고 농도 유기용매로 세척하면 회복될 수 있다(예., 메탄올 : 물 = 70 : 30).
순상 칼람 당류 분석 칼람 (Sugar-D, NH₂-MS) 또는친 수성 크로마토그라피 칼람		작은 양의 고정상이 떨어져 나옴.	물 없는 이동상으로 교체한다. 만약 시료용매에물이 있으면 시료용매를 교체하거니 시료주입량을 줄인다. 칼람에 물이 있으면 에탄올로 세척하여 회복시킨다. COSMOSIL Sugar-D 또 는 COSMOSIL HILIC칼람은 100% 물로 15분 동안 세척함으로써 회복될 수 있습니다. COSMOSIL 5NH2-MS 칼람은 50% 물로 15분 동안 세척하면 회복됩니다 (예., 아세토나이트릴 : 물 = 50 : 50).